[发明专利]一种含人转铁蛋白抗原表位序列的嵌合体抗原受体

说明书

本发明涉及一种含人转铁蛋白抗原表位序列的嵌合体抗原受体，它是一种嵌合抗原受体融合蛋白，从N端至C端包括：(i)包含V_H和V_L的单链可变片段(scFv)，其中scFv具有针对肿瘤抗原的活性，(ii)跨膜结构域，(iii)至少一个共刺激结构域，和(iv)激活结构域；其中所述融合蛋白包括人转铁蛋白片段，其人转铁蛋白片段是针对人转铁蛋白的抗体的抗原表位，在N端或C端到scFv，或在V_H和V_L之间。优选肿瘤抗原是CD19、CD22和BCMA。当与不含TF的相同CAR比较，并对癌症靶细胞具有相同的功效时，CD19‑TF‑CAR T细胞、CD22‑TF‑CAR T细胞和BAMA‑TF CAR T细胞分泌较少的细胞因子。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种含人转铁蛋白的抗原表位序列的嵌合体抗原受体。

背景技术

免疫疗法正成为治疗癌症的一种非常有前景的方法。T细胞或T淋巴细胞，我们的免疫系统的武装部队不断寻找外来抗原，并从正常细胞中区分异常(癌症或感染细胞)。用CAR基因修饰T细胞是设计肿瘤特异性T细胞的最常见方法。靶向肿瘤相关抗原(TAA)的CAR-T细胞可以注入患者中(称为过继性细胞转移或ACT)，其代表着有效过继免疫治疗方法。与化疗或抗体相比，CAR-T技术的优势在于重编程的工程化T细胞可以在患者体内增殖并持续存在。

CAR(嵌合抗原受体)通常由单链抗体衍生的单链可变片段(scFv)组成，其单链可变片段可通过铰链连接，然后将跨膜结构域链接到可变数目的胞内信号传导结构域上：单细胞激活CD3-zeta结构域；和CD28、CD137(4-1BB)或其他共刺激结构域，与CD3-zeta结构域串联(CD27信号结构域也用于取代CD28或CD137结构域)(图1)。

CAR的演化从第一代(没有共刺激域)到第二代(有一个共刺激域)到第三代(有几个共刺激域)。具有多个共刺激区域的CAR(所谓的第三代CAR)的产生会导致细胞溶解活性增加，并显著改善了抗肿瘤活性增强的CAR-T细胞的持久性。

转铁蛋白是与铁结合的转运蛋白，其可结合与阴离子结合的两个Fe³⁺离子。它负责将铁从吸收和血红素降解的位点转移到储存和利用的位点。血清转铁蛋白还可能在刺激细胞增殖中发挥进一步的作用。转铁蛋白由肝脏表达并分泌在血浆中。

发明内容

本发明提供一种含人转铁蛋白的抗原表位序列的嵌合体抗原受体，其中涉及的术语定义如下：

如本文所用，“嵌合抗原受体(CAR)”是指含有能够结合抗原的胞外结构域的融合蛋白，一个来自多肽的跨膜结构域，其不同于胞外结构域来源的多肽，以及至少一个胞内域。“嵌合抗原受体(CAR)”有时称为“嵌合受体”、“T体”或“嵌合免疫受体(CIR)”。“能够结合抗原的胞外结构域”是指任何可以结合某种抗原的寡肽或多肽。“胞内结构域”是指任何已知作为传递信号并可以引起细胞中的生物过程的激活或抑制的结构域的寡肽或多肽。

如本文所用，“结构域”是指多肽中的一个区域，其折叠成独立于其他区域的特定结构。

如本文所用，转铁蛋白抗原表位(TF)是多肽人转铁蛋白基序的15个氨基酸(TF抗体结合抗原表位)：序列为KNPDPWAKNLNEKDY(序列ID NO：1)，它是用于结合转铁蛋白抗体的抗原表位。TF是人转铁蛋白的564至578个氨基酸(蛋白质序列可以在Uniprot UP02787中获得；http://www.uniprot.org/uniprot/P02787)。它可以与蛋白质的C端或N端融合，或者插入蛋白质的胞外结构域。2TF、3TF、4TF和5TF分别是TF的15个氨基酸序列重复2-5次。1/2TF是TF的后半部分，即KNLNEKDY。如本文所用，“TF序列”包括TF、1/2TF和2-5TF，例如2TF和3TF。