[发明专利]瓜类病原真菌多重PCR检测试剂盒及其同时检测方法在审

专利信息
申请号: 201810924826.5 申请日: 2018-08-14
公开(公告)号: CN109022608A 公开(公告)日: 2018-12-18
发明(设计)人: 文朝慧;周小平;李儒;王军平;王溪桥;尤佳;满岳;左佳妮 申请(专利权)人: 甘肃出入境检验检疫局检验检疫综合技术中心
主分类号: C12Q1/6895 分类号: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11
代理公司: 甘肃省知识产权事务中心 62100 代理人: 马英
地址: 730010 甘肃*** 国省代码: 甘肃;62
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摘要:
搜索关键词: 瓜类 病原真菌 根腐病菌 蔓枯病菌 黑点 甜瓜 引物 孢霉 多重PCR检测 检测 阳性对照 试剂盒 生物技术领域 无菌去离子水 瓜类病害 重复检测 常规PCR 侵染
【说明书】:

发明属于生物技术领域,涉及一种瓜类病害的检测方法,主要针对瓜类3种重要病原真菌甜瓜黑点根腐病菌、瓜类蔓枯病菌和/或烟色织孢霉的同时检测。该瓜类病原真菌多重PCR检测试剂盒包括以下组分:PCR buffer,10×PCR buffer;甜瓜黑点根腐病菌上下游引物10μmol/L,瓜类蔓枯病菌上下游引物10μmol/L,烟色织孢霉上下游引物10μmol/L;DNA聚合酶;无菌去离子水;阳性对照:甜瓜黑点根腐病菌、瓜类蔓枯病菌和烟色织孢霉无侵染活性的阳性对照。本发明的优点是能同时检测瓜类3种重要病原真菌,快速准确,避免了常规PCR的重复检测。

技术领域

本发明属于生物技术领域,涉及一种瓜类病害的检测方法,主要针对葫芦科作物的3种重要病原真菌甜瓜黑点根腐病菌、瓜类蔓枯病菌和烟色织孢霉的同时检测。

背景技术

由甜瓜黑点根腐病菌Monosporascus cannonballus引起的黑点根腐病是甜瓜上的一种毁灭性土传真菌病害。症状包括植株在收获前逐渐黄化,基部老叶焦枯,表现藤枯病症。发病植株主根和侧根出现褐化和坏疽,在枯死的根上散生许多子囊壳。该病可造成的损失率大约为10%~25%,个别田块可达100%,已成为全球瓜类生产中新兴的重要病害,主要分布在以色列、突尼斯、伊朗、印度、巴基斯坦、利比亚、墨西哥、西班牙南部、美国西南部、沙特阿拉伯、日本、韩国、中国台湾、洪都拉斯、危地马拉、巴西、埃及、意大利等国家或地区,在我国甘肃省中部半干旱地区发现有甜瓜黑点根腐病,该病菌是我国进境植物检疫性有害生物。黑点根腐病的初侵染源主要为子囊孢子和在土壤中、病残体上存活的菌丝。M.cannonballus繁殖能力强,寄主范围和自然分布广,除了侵染西瓜和甜瓜( 包括洋香瓜)外,还可侵染为害冬瓜等葫芦科作物。在人工接种下可以危害胡瓜、越瓜、蒲瓜、丝瓜、南瓜及苦瓜等,对辣椒、甜椒、茄子、番茄等作物的幼苗亦有致病性,可在豆类、小麦、玉米、高粱和甜菜根上定殖。黑点根腐病发病初期在植株地上部分不表现明显症状,因而给病害的早期诊断和防治增加了难度,建立病菌快速、简便的分子诊断技术有助于病害的早期发现。

由瓜类黑腐球壳菌Didymella bryoniae引起的瓜类蔓枯病又称“油秧”、“污根”、“茎部流胶病”等,是一种危害瓜类作物的世界性病害,可侵染甜瓜、西瓜、南瓜、黄瓜、哈密瓜等多种葫芦科作物。蔓枯病菌自1869年在德国发现以来,美国、加拿大、荷兰、瑞典、日本、印度、我国台湾等均有该病为害瓜类作物的报道。在国内,新疆、甘肃、上海、浙江、江苏、陕西等省市区的哈密瓜和西甜瓜产区有蔓枯病发生,且大田发病率普遍在20%~30%,连作地和温室中高达80%。蔓枯病在瓜类蔬菜的整个生育期都能为害,可危害植株的茎、蔓、叶、花、果实等各部位,造成瓜秧长势衰弱,果实品质下降,减产15%~30%。瓜类蔓枯病具有发病迅速,防治困难的特点,病原菌可通过种子进行长距离的传播,形成异地扩散和蔓延,进行种子健康检测是防止该病害发生发展的重要手段。

烟色织孢霉Microdochium tabacinum又称癣囊腔菌、黄瓜萎蔫病菌、瓜萎原球菌等,可引起葫芦科作物根腐病。2000年该菌导致的病害在美国伊利诺斯州南瓜上大爆发,使南瓜减产50%,该病也对意大利、西班牙的葫芦科作物造成严重危害,2015年浙江台州西瓜嫁接砧木葫芦受到该病侵染,致使植株萎蔫,老叶黄化,根及根颈部腐烂,藤蔓收获前枯败。烟色织孢霉寄主范围广,可寄生超过200个属的植物,包括泽泻、花生、甜菜、意大利风铃草、辣椒、苦苣、甜瓜、南瓜、黄瓜、曼陀罗、菊花、大豆、向日葵、黑藻、白羽扇豆、番茄、芒果、烟草、罗勒、菜豆、毛茛、萝卜、野慈姑、马铃薯、姜等,引起植物根、根颈和果实腐烂、溃败。

瓜类真菌性病害分布于世界各葫芦科作物产区,甜瓜黑点根腐病菌、瓜类蔓枯病菌和烟色织孢霉均可侵染葫芦科作物,具有寄主范围广泛、难以防治的特点,一旦扩散和蔓延,将对瓜类生产造成严重损失。

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