[发明专利]一种肝癌鸡胚绒毛尿囊膜M-CDX模型的建立方法

说明书

本发明涉及生命科学领域，其具体是一种肝癌鸡胚绒毛尿囊膜M‑CDX模型的建立方法，建立方法包括将胚蛋在温度为35℃‑40℃、湿度为60‑80%的培养箱中孵育2‑4天，在胚蛋顶端剪开1cmx1cm窗口；将（0.5‑8）×10⁶数量的肝癌细胞掺入细胞外基质，制成细胞悬液，滴加到事先放于绒毛尿囊膜上的硅胶圈内，35℃‑40℃、湿度为50%‑65%条件下孵育2‑4天，并镜检拍照；本发明以鸡胚为模型，以肝癌细胞为移植对象构建肝癌鸡胚绒毛尿囊膜M‑CDX模型；M‑CDX荷瘤的载体是一层带有丰富血管的绒毛尿囊膜，比起传统模型，具有实验周期短，饲养成本低，以及方便操作等的独特优势；本制备方法所需操作器械、实验器材均简单易用，价格低廉，普通实验室可以常规配备，而制取过程又操作简便，无需长时间经验积累。

技术领域

本发明涉及生命科学领域，其具体是一种肝癌鸡胚绒毛尿囊膜M-CDX模型的建立方法。

背景技术

肿瘤动物模型作为人类肿瘤的复制，是肿瘤研究中不可缺少的手段，随着近代医学发展，特别是肿瘤学和免疫学研究的需要，免疫缺陷动物的出现解决了移植肿瘤的免疫排斥问题，人体肿瘤移植于免疫缺陷动物，能保持其生物学特性，对于研究人体肿瘤的机制，药物筛选提供了很大帮助。

CN102821600A提供癌症病态非人动物模型及其利用方法，其特征在于：可以再现人类癌症组织的等级结构、癌症进展过程或其生物学特性。CN102821600A为了解决上述课题，首先将NOG确立癌细胞株移植至NOG小鼠中，形态学观察其组织构建。结果证实，该非人动物模型保有与人类癌症疾病类似的病态(癌细胞的等级结构、癌症进展过程或其生物学特性)。

CN104771240A提供了用于抗肿瘤治疗方案筛选的肿瘤模型、用于制备该肿瘤模型的方法以及利用该肿瘤模型筛选抗肿瘤治疗方案的方法。其中，肿瘤模型来源于第一生物体内形成的肿瘤组织，所述肿瘤模型是通过所述第一生物体内形成的肿瘤组织在所述于第二生物体中增殖而获得的，其中，所述第一生物体与所述第二生物体不同。利用该肿瘤模型能够有效地筛选可以用于第一生物体的疗法。

为了了解恶性肿瘤在体的生物学行为特点，往往需要构建肿瘤在体模型模拟肿瘤真实生存环境。鸡胚绒毛尿囊膜（chorioallantoic membrance, CAM）在发育的早中期不排斥来自异种动物的组织、细胞移植，因此可作移植人类恶性肿瘤的接受体。CAM模型已广泛应用于新生血管生成、微循环、肿瘤生物学等方面的研究。

membrane-based cell-derived xenograft（M-CDX）基于膜的细胞来源的异体移植，即，将异种物种的肝癌细胞系移植到鸡胚绒毛尿囊膜中构建的模型。此模型可用于血管新生与肿瘤发生发展的互相作用，以及筛选有效抗肿瘤化合物的研究。

传统的CDX模型，荷瘤载体一般是裸鼠，裸鼠移植瘤可以保存原有组织学构造或各种功能，且将人癌组织的组织培养物移种于裸鼠时，能重现已在组织培养中消失的原有的癌结构。这些特征有助于分析人类肿瘤的性质，从而推动各方面的工作，为实验肿瘤学提供新的有效的工具。但是，由于裸鼠的饲养和繁殖要求条件比较严格，价格比较昂贵，相关裸鼠移植肿瘤模型存在一定局限性。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种肝癌鸡胚绒毛尿囊膜M-CDX模型的建立方法，建立方法包括将肝癌细胞种植在鸡胚绒毛尿囊膜上后，在适合条件下孵育过3天，用显微镜镜检。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种肝癌鸡胚绒毛尿囊膜M-CDX模型的建立方法，包括：

步骤1：将胚蛋在温度为35℃-40℃、湿度为50%-70%的培养箱中孵育2-4天，在胚蛋顶端剪开1cmx1cm窗口；