[发明专利]一种肺癌鸡胚绒毛尿囊膜M-CDX模型及制备方法

说明书

本发明涉及生命科学领域，其具体是一种肺癌鸡胚绒毛尿囊膜M‑CDX模型及制备方法，所述肺癌鸡胚绒毛尿囊膜M‑CDX模型为将异种物种的肺癌细胞移植到鸡胚绒毛尿囊膜中构建而成的，制备方法包括将胚蛋在温度为35℃‑40℃、湿度为60%‑80%的培养箱中孵育2‑4天，在胚蛋顶端剪开1cmx1cm窗口；将（0.5‑8）×10⁶数量的肺癌细胞掺入细胞外基质，制成细胞悬液，滴加到事先放于绒毛尿囊膜上的硅胶圈内，35℃‑40℃、湿度为50%‑65%条件下孵育3天，并镜检拍照；本发明以鸡胚为模型，以肺癌细胞为移植对象构建肺癌鸡胚绒毛尿囊膜M‑CDX模型；M‑CDX荷瘤的载体是一层带有丰富血管的绒毛尿囊膜，比起传统模型，具有实验周期短，饲养成本低，方便操作等独特优势；本制备方法所需操作器械、实验器材均简单易用，价格低廉。

技术领域

本发明涉及生命科学领域，其具体是一种肺癌鸡胚绒毛尿囊膜M-CDX模型及制备方法。

背景技术

肿瘤动物模型作为人类肿瘤的复制，是肿瘤研究中不可缺少的手段，随着近代医学发展，特别是肿瘤学和免疫学研究的需要，免疫缺陷动物的出现解决了移植肿瘤的免疫排斥问题，人体肿瘤移植于免疫缺陷动物，能保持其生物学特性，对于研究人体肿瘤的机制，药物筛选提供了很大帮助。

CN103239479A提供了一种人原发性皮肤鳞状上皮细胞癌肿瘤干细胞的动物模型建立方法，该方法包括：将收集的临床病例皮肤鳞状细胞癌组织制成单细胞悬液，分离出CD31-CD24-CD45-CD61-CD133+肿瘤干细胞群，再和1×10⁶人原代成纤维细胞，1×10⁶人原代内皮细胞悬混在基质胶中，再将其注射至经人性化裸鼠皮下致瘤部位的微环境中。

为了了解恶性肿瘤在体的生物学行为特点，往往需要构建肿瘤在体模型模拟肿瘤真实生存环境。鸡胚绒毛尿囊膜（chorioallantoic membrance, CAM）在发育的早中期不排斥来自异种动物的组织、细胞移植，因此可作移植人类恶性肿瘤的接受体。CAM模型已广泛应用于新生血管生成、微循环、肿瘤生物学等方面的研究。

membrane-based cell-derived ×enograft（M-CDX）基于膜的细胞来源的异体移植，即，将异种物种的肺癌细胞系移植到鸡胚绒毛尿囊膜中构建的模型。此模型可用于血管新生与肿瘤发生发展的互相作用，以及筛选有效抗肿瘤化合物的研究。

传统的CDX模型，荷瘤载体一般是裸鼠，裸鼠移植瘤可以保存原有组织学构造或各种功能，且将人癌组织的组织培养物移种于裸鼠时，能重现已在组织培养中消失的原有的癌结构。这些特征有助于分析人类肿瘤的性质，从而推动各方面的工作，为实验肿瘤学提供新的有效的工具。但是，由于裸鼠的饲养和繁殖要求条件比较严格，价格比较昂贵，相关裸鼠移植肿瘤模型存在一定局限性。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种肺癌鸡胚绒毛尿囊膜M-CDX模型及制备方法，此模型为将异种物种的肺癌细胞移植到鸡胚绒毛尿囊膜中构建而成的，制备方法包括将肺癌细胞种植在鸡胚绒毛尿囊膜上后，在适合条件下孵育过3天，用显微镜镜检。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种肺癌鸡胚绒毛尿囊膜M-CDX模型，包括鸡胚绒毛尿囊膜中移植有异种物种的肺癌细胞的鸡胚。

优选地，所述异种物种为人。

优选地，所述肺癌鸡胚绒毛尿囊膜M-CDX模型应用于抗肺癌药物筛选。

一种肺癌鸡胚绒毛尿囊膜M-CDX模型的制备方法，包括：

步骤1：将胚蛋在温度为35℃-40℃、湿度为60%-80%的培养箱中孵育2-4天，在胚蛋顶端剪开1cm×1cm窗口；