[发明专利]一种细胞外基质的制备及其应用

说明书

本发明属于生物工程技术领域，涉及一种细胞外基质的制备，具体用于鸡胚绒毛尿囊膜上细胞移植研究；所述细胞外基质由基质胶、纤连蛋白和多聚赖氨酸组成，在无菌环境下，将称量好的基质胶、纤连蛋白和多聚赖氨酸混合均匀；所述细胞外基质应用于鸡胚绒毛尿囊膜上细胞移植研究，在肿瘤细胞接种过程中，将所述细胞外基质与细胞悬液混合使用；本发明所获得的细胞外基质，具有较好的生物相容性、可增强细胞的抗药性、可促进细胞增殖，尤其可增加细胞的粘附作用；应用于用于鸡胚绒毛尿囊膜上细胞移植研究，提高肿瘤细胞的移植成活率。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，涉及一种细胞外基质的制备，具体用于鸡胚绒毛尿囊膜上细胞移植研究。

背景技术

将肿瘤细胞接种到鸡胚上进行异种移植建立移植瘤，是研究肿瘤较好的活体模型，其具有易于复制、操作简单、适用范围广等特点，可广泛应用于肿瘤血管生成机制及抗肿瘤药物筛选等研究。实验是通过收集指数生长期的肿瘤细胞，按照一定细胞浓度进行接种，在无菌环境下进行培养。鸡胚自身具有特异的生物环境，不同的肿瘤细胞对于鸡胚生物相容性不同，导致细胞移植成瘤率差异性较大。

目前肿瘤细胞悬液的溶剂多以PBS为主，具有盐平衡、可调整的适宜pH缓冲作用，但是要维持较佳的条件保证生物活性物质和增强生物相容性，就需要在细胞悬液中加入更多的成分，但是PBS为水溶性，稀释细胞液，降低了细胞的粘附作用，从而降低了细胞的生物活性物质。如何在保证细胞悬液生物相容性的同时，还可以提高细胞的粘附作用，这是我们研究的方向。

发明内容

本发明针对上述现有技术中存在的问题提供一种细胞外基质，参入细胞悬液中，一方面提高细胞的粘附性和生物相容性，另一方面促进细胞的增殖，增强抗药性，提高肿瘤细胞移植的成功率。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案

一种细胞外基质，所述细胞外基质由基质胶、纤连蛋白和多聚赖氨酸组成。

优选地，所述多聚赖氨酸的浓度为0.01%~0.09%。

优选地，所述基质胶、纤连蛋白和多聚赖氨酸的质量比依次为（1~10）:（1~8）:1。

优选地，所述基质胶、纤连蛋白和多聚赖氨酸的质量比依次为（2~6）:（1~4）:1。

优选地，所述基质胶、纤连蛋白和多聚赖氨酸的质量比依次为4:2:1。

一种细胞外基质的制备方法，包括以下步骤：

S1、在低温无菌环境下，将称量好的基质胶、纤连蛋白和多聚赖氨酸吸取到一个容器内混合；

S2、在混合溶液中加入交联剂；

S3、将混合溶液进行吹打混匀，反复吹打3~5次；

S4、混匀后的溶液在低温条件下静置超过0.5个小时。

优选地，在4℃无菌条件下，用移液器吸取基质胶、纤连蛋白和多聚赖氨酸混合并进行吹打混匀；吹打混匀后静置在4℃条件下，不低于0.5小时即可使用。

优选地，所述交联剂为双环氧化合物、京尼平和原花青素的混合物，质量比为1：3：4，所述交联剂的添加量为总溶液的3%~5%。

一种细胞外基质的应用，所述细胞外基质应用于鸡胚绒毛尿囊膜上细胞移植研究。

优选地，所述细胞外基质与细胞悬液的混合比例为（v/v）=1:（1~5）。

优选地，所述细胞外基质与细胞悬液的混合比例为（v/v）=1:2。

本发明的有益效果：本发明所获得的细胞外基质，具有较好的生物相容性、可增强细胞的抗药性、可促进细胞增殖，尤其可增加细胞的粘附作用；应用于用于鸡胚绒毛尿囊膜上细胞移植研究，提高肿瘤细胞的移植成活率。