[发明专利]一种培养基及用于诱导骨髓间充质干细胞成骨分化的用途

说明书

本发明公开了一种培养基及用于诱导骨髓间充质干细胞成骨分化的用途。本发明发现，莪术内酯A、莪术双环烯酮、表玫瑰萜醛D可以有效促进骨髓间充质干细胞成骨分化，莪术内酯B、玫瑰萜醛D作用不明显。因此，可以将莪术内酯A、莪术双环烯酮、表玫瑰萜醛D制备成促进骨髓间充质干细胞成骨分化的药物，也可将莪术内酯A、莪术双环烯酮、表玫瑰萜醛D添加到培养基制成促进骨髓间充质干细胞成骨分化的培养基。

技术领域

本发明属于干细胞领域，涉及骨髓间充质干细胞成骨分化。

背景技术

骨髓间充质干细胞(BMSCs)是骨祖细胞，能诱导分化成多种类型细胞，包括成骨细胞、软骨细胞等。报道表明，骨质疏松患者骨结构的损伤，与BMSCs成骨分化及增殖作用减弱有关。因此，增强骨形成是防治骨质疏松的一个重要策略。

促进BMSCs成骨分化是解决上述问题的切入点。

发明内容

本发明旨在促进骨髓间充质干细胞成骨分化。

本发明上述目的通过如下技术方案实现：

一种诱导骨髓间充质干细胞成骨分化的培养基，含有表玫瑰萜醛D。

表玫瑰萜醛D用于促进骨髓间充质干细胞成骨分化的用途。

表玫瑰萜醛D在制备促进骨髓间充质干细胞成骨分化的药物中的应用。

有益效果：

本发明发现，莪术内酯A、莪术双环烯酮、表玫瑰萜醛D可以有效促进骨髓间充质干细胞成骨分化，莪术内酯B、玫瑰萜醛D作用不明显。因此，可以将莪术内酯A、莪术双环烯酮、表玫瑰萜醛D制备成促进骨髓间充质干细胞成骨分化的药物，也可将莪术内酯A、莪术双环烯酮、表玫瑰萜醛D添加到培养基制成促进骨髓间充质干细胞成骨分化的培养基。

附图说明

图1为待测化合物的化学结构式；

图2为茜素红染色结果；

图3为骨钙素表达水平。

具体实施方式

下面结合附图和实施例具体介绍本发明实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。

一、实验材料

动物采用SPF级雌性SD大鼠，8周龄，体质量(200±20)g。

莪术内酯A、莪术内酯B、莪术双环烯酮、玫瑰萜醛D、表玫瑰萜醛D购买或自制，纯度不低于98％，化学结构式如图1所示。

L-DMEN培养基购自Hyclone公司，胎牛血清购自Gibco公司，茜素红购自Solarbio公司。PCR试剂盒购自Takara。

二、实验方法

1、骨髓间充质干细胞的分离纯化和培养

8周龄健康SD大鼠断颈法处死，无菌条件下分离股骨，磷酸盐缓冲液(PBS)漂洗3次后用咬骨钳咬去骨两骺端；用骨髓间充干细胞完全培养基(按体积分数配比：5％胎牛血清+1％双抗+94％L-DMEM)冲洗骨髓腔制备骨髓细胞悬液；移液枪反复吹打制成单细胞悬液后，移至培养瓶中。显微镜下观察细胞后将细胞置于5％CO₂、37℃、湿度75％的培养箱中恒温培养。48h后首次更换培养基，之后每3天换1次培养基。待细胞80％融合后传代，用胰蛋白酶消化细胞至大部分细胞重新悬浮，再加入完全培养基终止胰蛋白酶消化作用，200r/min离心5min，弃上清，用完全培养基重悬细胞后移至新的培养瓶中培养。反复传代纯化骨髓间充质干细胞，并在传至第3代后进行成骨细胞的诱导。

2、分组及给药