[发明专利]基于UPLC及一测多评法的白芷药材中香豆素类成分含量检测

说明书

本发明提供了一种白芷药材中香豆素类成分的UPLC检测方法。本发明的白芷药材中香豆素类成分的UPLC检测方法，基于“一测多评法”能同时检测白芷药材中香豆素类成分中的4种成分，且本法相较于常用的HPLC检测方法稳定性更好，准确度更高，检测时间更短，效率更高，降低了检测成本。克服了在缺乏异欧前胡素、氧化前胡素、水合氧化前胡素对照品的情况下，通过相对校正因子f及色谱峰定位计算其含量，实现白芷中主要香豆素成分异欧前胡素、氧化前胡素、水合氧化前胡素的含量测定，为白芷质量控制提供了新方法。

技术领域

本发明具体涉及基于UPLC及一测多评法的白芷药材中香豆素类成分含量检测。

背景技术

白芷为伞形科植物白芷Angelica dahurica(Fisch.ex Hoffm.)Benth.etHook.f.或杭白芷Angelica dahurica(Fisch.ex Hoffm.)Benth.etHook.f.var.formosana(Boiss.)Shan et Yuan的干燥根，使用历史悠久，临床上用于感冒头痛，眉棱骨痛，鼻塞流涕，鼻鼽，鼻渊，牙痛，带下，疮疡肿痛等证。研究表明白芷主要活性成分为香豆素类，主要有欧前胡素、异欧前胡素、氧化前胡素、水合氧化前胡素、白当归素、白当归脑、佛手柑内酯等。

目前，对白芷香豆素类化合物的研究也比较成熟，由最初简单的定性分析，逐步发展为采用精密仪器与方法进行定量的分析与研究，如TLC、UV、 HPLC等。目前关于白芷药材中香豆素类成分含量测定已有许多报道，但是都是基于HPLC及外标法测定的，如王梦月.白芷的古今药用概况及香豆素成分研究[D].成都:成都中医药大学，2003.33‐39.，用HPLC外标法测定了川白芷中主要香豆素类成分欧前胡素、异欧前胡素、水合氧化前胡素，但是其检测时间长、效率不高。

发明内容

为解决上述问题，本发明建立了一种新的白芷药材香豆素类成分的检测方法，具体是基于UPLC及白芷药材中香豆素类成分含量检测方法。

本发明基于UPLC的白芷药材中香豆素类成分含量检测方法，它包括如下操作步骤：

1)对照品溶液的制备：取香豆素类成分，用甲醇配制成对照品溶液；

2)供试品溶液的制备：取待测样品，甲醇提取，得供试品溶液；

3)检测：采用UPLC色谱法检测，色谱条件如下：色谱柱：C₁₈色谱柱；流动相:流动相包括A相和B相，A相为乙腈，B相为纯水，梯度洗脱，梯度洗脱的程序如下：0～2min，35％A；2～3min，35％～40％A；3～6min， 40％～50％A；6～9min，50％～57％A；9～11min，57％～58％A；11～12min， 58％～70％A；12～15min，70％～90％A；15～16min，90％～100％A；检测波长：305nm。

步骤1)中，所述香豆素类成分为欧前胡素、氧化前胡素、异欧前胡素和/或水合氧化前胡素。优选地，所述对照品溶液为每1mL含11.9μg欧前胡素、14.7μg氧化前胡素、10.4μg异欧前胡素和/或5.5μg水合氧化前胡素的溶液。

步骤2)中，甲醇提取的方法为：取待检样品，加入70～110倍v/w的甲醇，超声提取0.5～2h，滤过，取续滤液。优选地，所述甲醇的用量为待检样品90倍；超声提取的时间为1h。

步骤3)中，所述C₁₈色谱柱为Agilent Poroshell 120EC‐C_18,，Kinetex XB C18、CORTECSTM C18，优选Agilent Poroshell 120EC‐C18。

步骤3)中，所述的色谱条件的柱温为26～34℃,优选30℃；所述的色谱条件的流速为0.95mL·min^‐1～1.05mL·min^‐1,优选1.00mL·min^‐1。