[发明专利]一种检测血管内皮细胞中乙酰化PINK1的方法

权利要求书

1.一种血管内皮细胞中乙酰化PINK1蛋白半定量检测试纸，主要由样品垫，结合垫，吸水垫，底板，硝酸纤维膜五部分组成，其特征在于：所述硝酸纤维膜上分别划有两条平行的抗体捕获线，靠近结合垫的一条含有经过确定了浓度的第一抗血管内皮细胞中乙酰化PINK1蛋白I单克隆抗体，作为检测线，另一条含有经确定了浓度的羊抗兔IgG抗体，作为标准浓度显色对照线，两条线相距4～7mm；所述结合垫喷有胶体金或彩色乳胶标记的第二抗血管内皮细胞中乙酰化PINK1蛋白I单克隆抗体和金标兔IgG两种物质。

2.如权利要求1所述的血管内皮细胞中乙酰化PINK1蛋白半定量检测试纸，其特征在于，所述硝酸纤维膜与上部的吸水垫，硝酸纤维膜与下端的结合垫，结合垫与下部的样品垫之间分别部分重叠交接。

3.如权利要求1或2所述的血管内皮细胞中乙酰化PINK1蛋白半定量检测试纸，其特征在于，所用的胶体金或彩色乳胶标记的第二抗血管内皮细胞中乙酰化PINK1蛋白I单克隆抗体的金颗粒或乳胶大小在20nm～120nm间。

4.使用如权利要求1至3任一项所述的血管内皮细胞中乙酰化PINK1蛋白半定量检测试纸的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

选择两株抗血管内皮细胞中乙酰化PINK1蛋白I鼠源性特异单克隆抗体，即抗血管内皮细胞中乙酰化PINK1蛋白I单抗1和抗血管内皮细胞中乙酰化PINK1蛋白I单抗2；

选择抗血管内皮细胞中乙酰化PINK1蛋白I单抗1作为胶体金标记抗体，使用柠檬酸钠还原法制备为20nm～l20nm大小的纳米金颗粒，10000RPM/MIN离心10分钟，制备为储备液，将胶体金标记单抗，并加入聚乙二醇PEG，牛血清白蛋白BSA做稳定剂；

将标记好的金标抗体1，喷聚酯膜或玻璃纤维纸，低温干燥，制得金标结合垫；

将玻璃纤维膜浸泡在磷酸盐缓冲液PBS加表面活性剂的溶液中5分钟，再捞出30度左右烘干，制得样品垫；

将2cm宽的硝酸纤维膜粘在PVC片材中间位置，并定量喷涂抗血管内皮细胞中乙酰化PINK1蛋白I单抗2和定量的羊抗兔抗体两条相距5mm的1mm宽的条带，低温干燥10小时；

裁剪一定宽度的吸水纸，黏贴在PVC片材上硝酸纤维素膜的上部，并交叠硝酸纤维膜l～3mm；

将金标结合垫裁剪成5mm～13mm左右的条带，黏贴在PVC片材上硝酸纤维膜的下部，交叠硝酸纤维膜l～3mm；

将样品垫裁剪成25mm～30mm宽的条带，再黏贴在金标结合垫的下部，交接金标结合垫3mm～5mm；

再用40mm左右的带MAX线的不干胶，粘在金标结合垫和样品垫上；

用切割机将上面制得的大板，切成2.5mm～6mm的条带，即制备成了所述血管内皮细胞中乙酰化PINK1蛋白半定量检测试纸，然后用铝箔袋密封干燥备用。