[发明专利]一种适于植物染色体rDNA物理定位的探针组合和方法有效
| 申请号： | 201810928031.1 | 申请日： | 2018-08-14 |
| 公开（公告）号： | CN108977565B | 公开（公告）日： | 2019-06-18 |
| 发明（设计）人： | 席梦利;兰月;辛昊阳;赵乙琏;倪润欣;陈曦 | 申请（专利权）人： | 南京林业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6841;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙) 11371 | 代理人： | 李进 |
| 地址： | 210000 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 探针组合 探针 植物染色体 物理定位 分子细胞遗传学 染色体原位杂交 寡核苷酸探针 荧光原位杂交 高分辨率 原位杂交 染色体 捕获 制作 | ||
1.一种适于植物染色体rDNA物理定位的探针组合，其特征在于，其包括5S rDNA探针和45S rDNA探针；
所述5S rDNA探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；
所述45S rDNA探针由5.8S rDNA探针、18S rDNA探针和25S rDNA探针组成，所述5.8SrDNA探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述18S rDNA探针的核苷酸序列如SEQ IDNO.3所示，所述25S rDNA探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；
所述5S rDNA探针的两端标记有第一荧光基团；所述45S rDNA探针的两端标记有第二荧光基团。
2.根据权利要求1所述的探针组合，其特征在于，所述第一荧光基团为羧基荧光素；
所述第二荧光基团为羧基四甲基罗丹明。
3.根据权利要求1-2任一项所述的探针组合，其特征在于，所述植物选自郁金香、百合、玉米、牵牛花和秋海棠。
4.一种植物染色体原位杂交的方法，其特征在于，其包括如下步骤：
原位杂交步骤：往植物染色体制片上加入杂交液，进行杂交；
其中，所述杂交液含有权利要求1-3任一项所述的探针组合。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述杂交液中5S rDNA探针浓度为1-2ng/μl。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述杂交液中45S rDNA探针的浓度为1-2ng/μl。
7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述杂交液还含有：dFA、SSC缓冲液和DS。
8.根据权利要求4-7任一项所述的方法，其特征在于，在原位杂交步骤之前，所述方法还包括预处理步骤；
所述预处理步骤包括：将取得的植物体根尖用环乙酰胺溶液在室温下浸泡，用蒸馏水冲洗后转移到卡诺固定液中。
9.根据权利要求4-7任一项所述的方法，其特征在于，所述植物选自郁金香、百合、玉米、牵牛花和秋海棠。
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