[发明专利]重组载体及其制备方法、以及提高蔬菜作物芜菁花叶病毒抗性和/或产量的方法

说明书

本发明涉及一种重组载体及其制备方法、以及提高蔬菜作物芜菁花叶病毒抗性和/或产量的方法。本发明提供的重组载体包括：如SEQ ID NO.8所示RNA序列互补的结合位点。该重组载体的转录RNA产物通过与miR1885a结合介导miR1885a的降解或是抑制其对靶标的调控。

技术领域

本发明总地涉及生物技术领域，具体涉及重组载体及其制备方法、以及提高蔬菜作物芜菁花叶病毒抗性和/或产量的方法。

背景技术

微RNA microRNA(miRNA)可调控靶标基因的mRNA表达水平和翻译，因此在植物生长发育以及抗胁迫过程中发挥着重要的作用。在抗病过程中，miRNA通过靶向抗病过程中的重要基因来影响植物与病原微生物的相互作用。

发明人早期研究发现，从油菜中克隆的miRNA bra-miR1885a能够特异地被芜菁花叶病毒Turnip Mosaic Virus(TuMV)诱导表达。TuMV 属于马铃薯Y病毒科(Potyviridae)成员，是世界五大对蔬菜作物造成最严重损坏的植物病原病毒之一。同时发现miR1885a能够靶向一系列的R基因，而植物R基因能够通过下游的水杨酸(SA)途径发挥抗病作用。但由于早期油菜基因组的参考序列并不完整，因而无法深入研究 miR1885a在油菜与TuMV互作中的作用。

发明内容

本发明的目的在于提供能够捕获蔬菜作物miRNA bra-miRNA1885a的质粒载体，通过与miR1885a结合介导miR1885a的降解或是抑制其对靶标的调控。并提供了该载体的制备方法，以及一种提高蔬菜作物芜菁花叶病毒抗性和/或蔬菜作物产量的方法。

本发明提供了一种重组载体，其中，所述重组载体包括：如SEQ ID NO.8所示RNA序列互补的结合位点。

优选地，根据前述的重组载体，其中，所述结合位点为完全互补或不完全互补。

更优选地，根据前述的重组载体，其中，所述不完全互补为所述结合位点包括不与SEQ ID NO.8所示RNA序列互补的3-4个连续碱基，最优选地，所述结合位点序列为GGAATCATACCctaTTTCATTGATG (SEQ ID NO.11)。

优选地，根据前述的重组载体，其中，所述重组载体包括DNA序列如SEQ ID NO.5所示。

或更优选地，根据前述的重组载体，其中，原始载体为植物双元表达载体。优选为pCAMBIA-1300或pBI121。

本发明还提供了前述重组载体的制备方法，其中，所述方法包括：

(1)扩增DNA片段，所述DNA片段包括如SEQ ID NO.8所示 RNA序列互补的结合位点；

(2)通过重组反应将所述DNA片段插入所述原始载体。

优选地，根据前述的制备方法，其中，所述方法包括：

(a)扩增包括如SEQ ID NO.5所示的DNA片段；

(b)通过重组反应将所述DNA片段插入所述原始载体。

本发明还提供了一种提高蔬菜作物芜菁花叶病毒抗性和/或蔬菜作物产量的方法，其中，所述方法包括抑制所述蔬菜作物中miR1885a的功能。

优选地，根据前述的方法，其中，所述抑制miR1885a的功能为降解miR1885a和/或抑制miR1885a对靶标的调控。

更优选地，根据前述的方法，其中，所述方法包括将前述的重组载体转化至所述蔬菜作物。

再优选地，根据前述的方法，其中，所述蔬菜作物为油菜、白菜或花椰菜。