[发明专利]一种黄瓜幼胚组织培养的方法

说明书

本发明提供了一种黄瓜幼胚组织培养的方法，包括如下步骤：A)幼胚获得：将授粉后的黄瓜洗干净切成两半，取出黄瓜幼胚；B)初代培养：将幼胚接种于初代培养基中培养；C)继代培养：选择外植体接种于继代培养基中培养，待外植体产生的丛生芽长有3‑5个腋芽时，转接至初代培养基中生长，之后再转接至继代培养基中继续增殖；D)生根培养：将外植体接种于生根培养基中培养；E)组培苗炼苗和移栽。本发明提供的一种黄瓜幼胚组织培养的方法，采用幼胚培养方式大大提高了黄瓜的萌发成苗率，缩短了育种周期，加速了良种繁育，提高了黄瓜种质创新和新品种选育效率，对推动黄瓜产业发展具有重要意义。

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，特别地，涉及一种黄瓜幼胚组织培养的方法。

背景技术

黄瓜是世界性的重要蔬菜作物之一，在全球蔬菜供应中具有举足轻重的地位。我国是黄瓜的生产大国，其栽培面积约占全国蔬菜总面积的10％，2012年我国黄瓜产量约78亿吨，居世界第一位。黄瓜杂种优势明显，一般比常规品种可增产20％以上。早在19世纪60年代，日本黄瓜品种就已全部采用杂交种，美国在20世纪末黄瓜杂交种占黄瓜品种的85.7％。我国黄瓜育种也是采用杂种优势育种，F₁代利用越来越广泛。目前利用传统方法选育一个优良新品种需5-6代，所需时间为3-4年，这种育种周期长，效率低。简化育种流程、缩短育种时间、提高育种效率越来越受黄瓜育种家们的重视。

有鉴于此，针对现有的问题予以研究改良，提供一种黄瓜幼胚组织培养的方法，旨在通过该技术，达到简化黄瓜育种流程、缩短育种时间、提高育种效率，丰富黄瓜育种基因库，创制更多具有价值的新种质新材料的目的。

发明内容

本发明目的在于提供一种黄瓜幼胚组织培养的方法，以解决现有技术中黄瓜育种流程多、育种周期长、效率低的技术问题。

为实现上述目的，本发明提供了一种黄瓜幼胚组织培养的方法，包括如下步骤：

A)幼胚获得：取田间授粉后的黄瓜冲洗干净，用酒精棉球擦拭黄瓜果皮2-3次；再将黄瓜切成两半，最后将黄瓜幼胚轻轻取出，接种；

B)初代培养：将幼胚接种于初代培养基中培养；

C)继代培养：选择初代培养后苗高在4cm以上且具有3-5个腋芽的外植体，剪成带有1-2个腋芽的茎段，接种于继代培养基中培养，待外植体产生的丛生芽长有3-5个腋芽时，分离所述丛生芽，转接至初代培养基中使腋芽伸长，苗高4cm以上后再转接至继代培养基中继续增殖；

D)生根培养：选择苗高4cm以上且具有3-5个腋芽的外植体，接种于生根培养基中培养；

E)组培苗炼苗和移栽：选择苗高6cm以上、具有6-8个腋芽、已生根且根系发达的组培苗进行炼苗和移栽；

其中，所述初代培养基为1/2MS培养基+20g/L的碳源+6g/L的琼脂粉+0.3-1.0g/L的核苷酸蛋白，pH值范围为5.5-5.8；

所述继代培养基为MS培养基+0.5-1.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤+0.3-0.7mg/L的赤霉素+30g/L的蔗糖+6g/L的琼脂粉+0.01-0.05g/L的丝氨酸，pH值范围为5.5-5.8；

所述生根培养基为1/2MS培养基+0.3-0.6mg/L的萘乙酸+15g/L的碳源+6g/L的琼脂粉，pH值范围为5.5-5.8。

进一步的，所述初代培养基中包括0.5g/L的核苷酸蛋白。

进一步的，所述继代培养基中包括0.03g/L的丝氨酸。

进一步的，所述步骤A)中的黄瓜为田间人工授粉后25-30d的黄瓜。

进一步的，所述步骤A)中的黄瓜选择主藤藤条距地面1/3之内的黄瓜。