[发明专利]NUMB基因用于筛选哈萨克马泌乳性能的试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种NUMB基因分型检测试剂盒在筛选哈萨克马泌乳性能中的应用，其特征在于，所述用于检测NUMB基因的等位基因型的等位基因分型位点是g.18986402GA位点,包括GA和GG基因型；

所述的试剂盒通过以下共建体系建成获得：

（1）引物设计及合成：根据马的NUMB基因的DNA序列，GenBank ID：100050235，自行人工设计特异性引物；

（2）PCR反应试剂：2×Master Mix、上下游引物、DNA模板和水；

所述的特异性引物序列如下所示：

上游引物1：5'-GAAGGTCGGAGTCAACGGATTATTCCCTTGGAAAGGCGG-3'；

上游引物2：5'-GAAGGTGACCAAGTTCATGCTATTCCCTTGGAAAGGCGA-3'；

下游引物1：5'-AGTTCTCCAGCCTCCTCCAC-3'；

在应用中，通过选择基因型为GG的个体，淘汰基因型为GA的个体，提高哈萨克马的产奶量，加快新疆专门化乳用马品种的培育。

2.如权利要求1所述的一种NUMB基因分型检测试剂盒在筛选哈萨克马泌乳性能中的应用，其特征在于，所述的检测试剂盒包括盒体，盒体外侧设置标签一，盒体内由隔板依次分为96孔板区、枪头区、采血管区、DNA提取试剂区、PCR扩增试剂区和Marker区，96孔板区、枪头区、采血管区、DNA提取试剂区、PCR扩增试剂区和Marker区上均设置分盖体，分盖体上设置标签二。

3.如权利要求2所述的一种NUMB基因分型检测试剂盒在筛选哈萨克马泌乳性能中的应用，其特征在于，所述的检测试剂盒中，盒体呈圆柱状，盒体内中部设置中心柱，中心柱顶端设置轴孔，分盖体底部设置与轴孔相适应的旋转轴。

4.如权利要求2所述的一种NUMB基因分型检测试剂盒在筛选哈萨克马泌乳性能中的应用，其特征在于，所述的检测试剂盒中，96孔板区、枪头区、采血管区、DNA提取试剂区、PCR扩增试剂区和Marker区均为扇形区域，分盖体呈六分之一扇形状。

5.如权利要求2所述的一种NUMB基因分型检测试剂盒在筛选哈萨克马泌乳性能中的应用，其特征在于，所述的检测试剂盒中，分盖体的半径大于盒体的半径。

6.如权利要求3所述的一种NUMB基因分型检测试剂盒在筛选哈萨克马泌乳性能中的应用，其特征在于，所述的检测试剂盒中，所述轴孔在中心柱顶端呈圆周阵列设置。

7.如权利要求2所述的一种NUMB基因分型检测试剂盒在筛选哈萨克马泌乳性能中的应用，其特征在于，所述的检测试剂盒中，盒体两侧设置把手，盒体底端和分盖体顶端相平齐设置。

8.如权利要求1所述的一种NUMB基因分型检测试剂盒在筛选哈萨克马泌乳性能中的应用，其特征在于，所述应用中，通过检测方法体现，具体包括如下步骤：

（1）组织样基因组DNA的提取：活体采集待测哈萨克马颈静脉血5ml，利用装有枸橼酸钠抗凝剂的采血管，-20℃保存；利用所述提供的试剂盒提取基因组DNA，-20℃保存待用；

（2）NUMB基因PCR扩增：根据设计的引物，所述的试剂盒特异性扩增NUMB基因；PCR反应体系为，2×Master Mix 10.0μl，上下游引物各0.07μl，DNA模板30-50μg，加水至总体积5μl；反应条件为，95℃预变性10min，95℃变性20s、循环10次，61-55℃延伸1min，95℃变性20s、循环26次，55℃延伸1min，4℃保存；

（3）KASP分型：基于引物末端碱基的特异匹配来对SNP分型，利用Douglas平台，对SNP进行双等位基因判断，从而进行基因分型。