[发明专利]EML4-ALK融合基因荧光定量PCR检测的试剂盒

说明书

本发明提供一种EML4‑ALK融合基因荧光定量PCR检测的试剂盒，包括：反应缓冲液、MgCl₂、dNTP、引物混合液I、引物混合液II、引物混合液III、引物混合液IV、引物混合液V、引物混合液VI、引物混合液VII、引物混合液VIII、DNA聚合酶、纯化水、阳性质控品，以上引物和探针浓度均为10umol，每个混合液中引物与探针的体积比例为2.5:1。试剂盒的扩增反应体系包括：DNA聚合酶：0.2ul，引物混合液：1.2ul，样本/阳性质控品/纯化水：2ul，纯化水：12.1ul，MgCl₂:2ul，10*buffer:2ul，dNTP:0.5ul，本发明检测灵敏度高，特异性好，分别针对EML4‑ALK融合基因7种变异体设计了特异性引物和荧光探针，相关反应液分管进行检测，可以排除各引物间的干扰，比将采用混合反应液的情形更能极大地提高检测特异性和灵敏度，且假阳性低。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体为一种EML4-ALK融合基因荧光定量PCR检测的试剂盒。

背景技术

肺癌是世界上发病率和死亡率最高的恶性肿瘤。近50多年来，世界各国特别是工业发达国家，肺癌的发病率和病死率均迅速上升。1995年全世界有60万人死于肺癌，而且每年人数都在上升，2003年世界卫生组织(WHO)公布的死亡率是110万/年，发病率是120万/年。肺癌的病因至今尚不完全明确，医学统计表明肺癌的致病因素主要为吸烟(包括二手烟)，80％的男性肺癌和75％的女性肺癌是由吸烟造成的，此外与石绵、氡、砷、电离辐射、卤素烯类、多环性芳香化合物、镍等工业致癌物的接触，种族、家属史对肺癌的发病均有影响。

肺癌分小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC)，NSCLC包括鳞癌、腺癌、腺鳞癌、大细胞癌、类癌等。NSCLC占所有肺癌病例的80％—90％，严重威胁人类健康。NSCLC的治疗包括手术、化疗、放疗、分子靶向治疗及生物免疫治疗等多种方法。手术治疗是NSCLC最佳治疗方法，但当NSCLC发现时，仅20％—30％的病例有手术指征，且术后复发和转移率仍高达50％以上。分子靶向治疗以其符合生理、低毒和理论上高效的特点，越来越成为非小细胞肺癌治疗的热点。靶向治疗为肺癌的治疗增添了一个新的领域，也为肺癌的治疗带来了新的希望。