[发明专利]一种血栓弹力图法肝素定量检测试剂盒及其制备方法

说明书

一种血栓弹力图法肝素定量检测试剂盒，包括缓冲剂、凝血因子Xa、兔脑凝脂、凝血因子活化剂、支持剂、生物防腐剂；制备方法包括：配制缓冲液、凝血因子Xa储备液、凝血因子活化剂储备液、生物防腐液、兔脑凝脂储备液；取支持剂加入缓冲液配制成支持液；按试剂盒规格要求将凝血因子Xa、凝血因子活化剂、兔脑凝脂储备液加到支持液中，混匀后加入生物防腐液、再加入缓冲溶液至规定量，混匀后分装冻干。本发明能通过血栓弹力图检测法对样本中的肝素进行定量检测，线性范围内相关性好，符合肝素检出限标准且变异系数不大于10%，样本采用全血，无需额外处理，对凝血瀑布中的蛋白完整性亦无要求，简化了检验操作流程，方便了医生和患者。

技术领域

本发明涉及一种血栓弹力图法肝素定量检测试剂盒及其制备方法，属于医疗器械技术领域。

背景技术

肝素，因首先从肝脏中发现而得名，也存在于肺、血管壁、肠粘膜等组织中，是葡萄糖胺、L-艾杜糖醛苷、N-乙酰葡萄糖胺和D-葡萄糖醛酸交替组成的黏多糖硫酸脂，呈强酸性，是动物体内一种天然抗凝血物质，天然存在于肥大细胞，现主要从牛肺或猪小肠黏膜中提取。

临床上最初应用的肝素称为标准肝素、普通肝素或未分级肝素(UnfractionatedHeparin)，平均分子量为15KD，临床上主要用于抗凝血和抗血栓，治疗各种原因引起的弥漫性血管内凝血和抗血栓，以及血液透析、体外循环、导管术、微血管手术等操作中的抗凝血处理等。同时，临床应用及研究显示，标准肝素还具有其他多种生物活性和临床用途，包括抗炎、抗过敏、降血脂、抗动脉粥样硬化、抗中膜平滑肌细胞(SMC)增生、抗病毒、抗癌等作用。

低分子肝素是普通肝素经过物理分离法、化学裂解法与合成法等使标准肝素解聚而成，相对分子量为3000～7000。低分子量肝素的活性/抗凝血活性的比值为1.5～4.0，而普通的肝素为1，保持了肝素的抗血栓作用而降低了出血的危险，具有半衰期长，生物利用度高等优点，主要用于防治血栓形成和栓塞，治疗各种原因的弥散性血管内凝血(DIC)以及其他体内外抗凝血，如心肌梗死及肺、脑、外周血管栓塞，体外循环等，其有效性和安全性均优于普通肝素，量效关系明确，可用固定剂量，无需实验室监测调整剂量，应用方便。

然而，肝素用量过大，可发生自发性出血，包括皮肤、口腔及鼻黏膜、关节、内脏等均可发生出血，甚至可发生脑、脊髓、肾上腺等重要器官出血，大量出血可导致休克。对肝素过敏者，可出现急性鼻炎、严重哮喘、荨麻疹、结膜炎、血管神经性水肿、发热等，偶尔还会出现过敏性休克。此外，部分病人还可出现血管痉挛性反应，表现为患肢疼痛、缺血或青紫，或有四肢感觉异常、全身血管痉挛、表皮淤血、头痛、呼吸急促等症状。肝素治疗4个月以上，可发生骨质疏松及自发性骨折，偶有脱发、肌注局部疼痛、脂肪萎缩、皮肤坏死，少数病人可有心律失常，极少数病人使用肝素后体内会形成肝素性的抗血小板抗体，由此可造成严重血小板缺乏症而发生出血。

肝素的抗凝作用一般认为主要通过两个方面发挥作用：①是对凝血酶的抑制作用；②是对凝血活性因子Xa(FXa)的抑制作用。两者都依赖于肝素的戊糖结构与抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)的结合。经肝素结合的抗凝血酶-Ⅲ结合凝血酶和FXa的能力增强，其中肝素抗凝血酶的作用不但要求肝素与AT-Ⅲ的结合，还同时要求肝素与凝血酶的直接结合，这就需要肝素分子有足够的长度，一般至少18个单糖的长度，分子量至少为5000D，但肝素增强抗凝血酶-Ⅲ抑制FXa的作用不需要肝素与FXa直接接触，此种作用对肝素无最低分子量上的要求。低分子肝素由于片断较短，大部分分子长度均小于18个单糖长度，因此其抗凝血酶的作用远低于其抗FXa作用。

现有技术中，肝素常用检测方法包括以下几种。

(1)APTT法：