[发明专利]一种血栓弹力图法肝素定量检测试剂盒及其制备方法有效
申请号: | 201810932949.3 | 申请日: | 2018-08-16 |
公开(公告)号: | CN108982865B | 公开(公告)日: | 2021-05-11 |
发明(设计)人: | 王连升;李红梅 | 申请(专利权)人: | 上海原科实业发展有限公司 |
主分类号: | G01N33/66 | 分类号: | G01N33/66 |
代理公司: | 北京化育知识产权代理有限公司 11833 | 代理人: | 涂琪顺 |
地址: | 201318 上海*** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 血栓 弹力 肝素 定量 检测 试剂盒 及其 制备 方法 | ||
一种血栓弹力图法肝素定量检测试剂盒,包括缓冲剂、凝血因子Xa、兔脑凝脂、凝血因子活化剂、支持剂、生物防腐剂;制备方法包括:配制缓冲液、凝血因子Xa储备液、凝血因子活化剂储备液、生物防腐液、兔脑凝脂储备液;取支持剂加入缓冲液配制成支持液;按试剂盒规格要求将凝血因子Xa、凝血因子活化剂、兔脑凝脂储备液加到支持液中,混匀后加入生物防腐液、再加入缓冲溶液至规定量,混匀后分装冻干。本发明能通过血栓弹力图检测法对样本中的肝素进行定量检测,线性范围内相关性好,符合肝素检出限标准且变异系数不大于10%,样本采用全血,无需额外处理,对凝血瀑布中的蛋白完整性亦无要求,简化了检验操作流程,方便了医生和患者。
技术领域
本发明涉及一种血栓弹力图法肝素定量检测试剂盒及其制备方法,属于医疗器械技术领域。
背景技术
肝素,因首先从肝脏中发现而得名,也存在于肺、血管壁、肠粘膜等组织中,是葡萄糖胺、L-艾杜糖醛苷、N-乙酰葡萄糖胺和D-葡萄糖醛酸交替组成的黏多糖硫酸脂,呈强酸性,是动物体内一种天然抗凝血物质,天然存在于肥大细胞,现主要从牛肺或猪小肠黏膜中提取。
临床上最初应用的肝素称为标准肝素、普通肝素或未分级肝素(UnfractionatedHeparin),平均分子量为15KD,临床上主要用于抗凝血和抗血栓,治疗各种原因引起的弥漫性血管内凝血和抗血栓,以及血液透析、体外循环、导管术、微血管手术等操作中的抗凝血处理等。同时,临床应用及研究显示,标准肝素还具有其他多种生物活性和临床用途,包括抗炎、抗过敏、降血脂、抗动脉粥样硬化、抗中膜平滑肌细胞(SMC)增生、抗病毒、抗癌等作用。
低分子肝素是普通肝素经过物理分离法、化学裂解法与合成法等使标准肝素解聚而成,相对分子量为3000~7000。低分子量肝素的活性/抗凝血活性的比值为1.5~4.0,而普通的肝素为1,保持了肝素的抗血栓作用而降低了出血的危险,具有半衰期长,生物利用度高等优点,主要用于防治血栓形成和栓塞,治疗各种原因的弥散性血管内凝血(DIC)以及其他体内外抗凝血,如心肌梗死及肺、脑、外周血管栓塞,体外循环等,其有效性和安全性均优于普通肝素,量效关系明确,可用固定剂量,无需实验室监测调整剂量,应用方便。
然而,肝素用量过大,可发生自发性出血,包括皮肤、口腔及鼻黏膜、关节、内脏等均可发生出血,甚至可发生脑、脊髓、肾上腺等重要器官出血,大量出血可导致休克。对肝素过敏者,可出现急性鼻炎、严重哮喘、荨麻疹、结膜炎、血管神经性水肿、发热等,偶尔还会出现过敏性休克。此外,部分病人还可出现血管痉挛性反应,表现为患肢疼痛、缺血或青紫,或有四肢感觉异常、全身血管痉挛、表皮淤血、头痛、呼吸急促等症状。肝素治疗4个月以上,可发生骨质疏松及自发性骨折,偶有脱发、肌注局部疼痛、脂肪萎缩、皮肤坏死,少数病人可有心律失常,极少数病人使用肝素后体内会形成肝素性的抗血小板抗体,由此可造成严重血小板缺乏症而发生出血。
肝素的抗凝作用一般认为主要通过两个方面发挥作用:①是对凝血酶的抑制作用;②是对凝血活性因子Xa(FXa)的抑制作用。两者都依赖于肝素的戊糖结构与抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)的结合。经肝素结合的抗凝血酶-Ⅲ结合凝血酶和FXa的能力增强,其中肝素抗凝血酶的作用不但要求肝素与AT-Ⅲ的结合,还同时要求肝素与凝血酶的直接结合,这就需要肝素分子有足够的长度,一般至少18个单糖的长度,分子量至少为5000D,但肝素增强抗凝血酶-Ⅲ抑制FXa的作用不需要肝素与FXa直接接触,此种作用对肝素无最低分子量上的要求。低分子肝素由于片断较短,大部分分子长度均小于18个单糖长度,因此其抗凝血酶的作用远低于其抗FXa作用。
现有技术中,肝素常用检测方法包括以下几种。
(1)APTT法:
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