[发明专利]数字PCR检测方法

权利要求书

1.一种数字PCR检测方法，其特征在于，包括：

S10，制备待测核酸扩增反应液；

S20，将所述待测核酸扩增反应液微滴化，形成微液滴阵列；

S30，将所述微液滴阵列进行聚合酶链式反应，并获取所述微液滴阵列中每个微液滴的荧光曲线与每个微液滴的熔解曲线；以及

S411，根据所述微液滴阵列的荧光曲线，获取每个所述微液滴的所述荧光曲线对应的Ct值；

S412，根据每个所述微液滴的所述荧光曲线的Ct值进行聚类，并依次由大到小进行排序，获得x₁，x₂，....x_n个类别；

S413，根据所述x₁，x₂，....x_n个类别，获得每个类别对应的所述微液滴的数量y₁、y₂、....y_n；

S414，根据每个类别对应的所述微液滴的数量y₁、y₂、....y_n，获得所述x₁，x₂，....x_n个类别对应的所述微液滴的数量y₁、y₂、....y_n频数分布；

S415，(1)当所述x₁类别的所述微液滴的数量y₁大于或等于特征值m时，根据所述频数分布进行泊松分布拟合，获得泊松分布的参数λ，从而获得所述微液滴阵列的核酸起始拷贝数；

(2)当所述x₁类别的所述微液滴的数量y₁小于所述特征值m时，包括：

S4151，根据所述x₂，....x_n个类别对应的所述微液滴的数量y₂、....y_n的部分频数分布，依次假设所述x₂类别对应的所述核酸起始拷贝数，并进行泊松分布拟合，获取每个泊松分布对应的参数λ_j(j＝0，1，2....)；

S4152，在一个区间[λ_min,λ_max]内搜索λ_j，使得频数值误差平方和err最小，获得最优λ_optimal；

S4153，根据所述最优λ_optimal，计算所述微液滴阵列的核酸起始拷贝数；以及

S420，根据所述微液滴阵列的熔解曲线，获取所述微液滴阵列的核酸信息。

2.如权利要求1所述的数字PCR检测方法，其特征在于，所述S30包括：

S310，设置聚合酶链式反应的温度参数、时间参数以及循环次数；

S320，根据所述温度参数以及所述时间参数对所述微液滴阵列进行聚合酶链式反应，依次完成所述循环次数，并获取每次循环过程的每个所述微液滴的荧光曲线；以及

S330，将完成聚合酶链式反应扩增后的所述微液滴阵列降温，并以特定的温度间隔进行升温，获取每个所述微液滴的熔解曲线。

3.如权利要求2所述的数字PCR检测方法，其特征在于，所述S320包括：

S321，根据所述温度参数以及所述时间参数对所述微液滴阵列进行聚合酶链式反应，获取所述微液滴阵列的荧光图像；

S322，根据所述循环次数依次循环，获取所述微液滴阵列在聚合酶链式反应过程中的全部荧光图像；

S323，根据所述微液滴阵列的全部荧光图像，获取每次循环过程的每个所述微液滴的荧光信息；以及

S324，根据每次循环过程的每个所述微液滴的荧光信息，获取每个所述微液滴的荧光曲线，从而获得所述微液滴阵列的荧光曲线。