[发明专利]一株抗呋喃苯烯酸钠单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用

说明书

一株抗呋喃苯烯酸钠单克隆抗体杂交瘤细胞株SS0716及其应用，属于食品安全免疫检测技术领域。本发明制备的抗呋喃苯烯酸钠单克隆抗体杂交瘤细胞株SS0716，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14686，保藏日期为2017年9月5日。抗呋喃苯烯酸钠单克隆抗体，由所述保藏编号为CGMCC No.14686的杂交瘤细胞株SS0716所分泌产生。此细胞株分泌的单克隆抗体，对呋喃苯烯酸钠（NSOD）具有较好的特异性和检测灵敏度（IC₅₀值为0.38μg/L），可以用于食品安全中呋喃苯烯酸钠的检测。

技术领域

本发明涉及一株抗呋喃苯烯酸钠单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检测技术领域。

背景技术

呋喃苯烯酸钠（简称NSOD）属于硝基呋喃类药物，是人工合成的一种广谱抗菌药物，对动物和鱼类的细菌预防和治疗有良好效果。但是，世界卫生组织和联合国粮农组织联合报道硝基呋喃类药物具有潜在的致突变和致癌性。为保护消费者的健康，世界各国纷纷禁止硝基呋喃类药物在食品动物上的使用。然而，这些药物的违法使用现象仍然存在。

欧盟已将硝基呋喃类药物列为Ａ类禁用药，在动物源性食品中检测限为不得检出。我国农业部已把部分硝基呋喃类药物作为动物源食品中不得检出的项目，呋喃苯烯酸钠于2002被我国禁用。

目前，国内外色谱法对呋喃苯烯酸钠残留检测主要采用HPLC-UV作为检测手段，而HPLC法由于检测灵敏度低、前处理操作繁琐费时，不能满足进出口贸易中各国对呋喃苯烯酸钠残留限量要求。而且，仪器方法存在操作繁琐，耗时，费用比较贵等缺点，不能实现大量样品的快速检测，因此建立一种快速简便的呋喃苯烯酸钠残留检测方法具有重要意义。

酶联免疫法（ELISA）是一种极为高效、敏感、快速的检测方法，操作简便，适用于大量样本的现场快速检测。然而得到高特异性和高灵敏性的单克隆单体是免疫学检测的前提，所以，制备一种高灵敏度、特异性的杂交瘤细胞至关重要。

发明内容

本发明的目的在于克服上述不足之处，提供抗呋喃苯烯酸钠单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，由该细胞株制备的抗体对呋喃苯烯酸钠NSOD具有较好特异性和检测灵敏度，可以用来建立呋喃苯烯酸钠NSOD的免疫学检测方法。

按照本发明提供的技术方案，一株抗呋喃苯烯酸钠单克隆抗体杂交瘤细胞株SS0716，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.14686，保藏日期为2017年9月5日。

抗呋喃苯烯酸钠单克隆抗体，其由保藏编号为CGMCC No.14686的抗呋喃苯烯酸钠单克隆抗体杂交瘤细胞株SS0716分泌产生。

所述抗呋喃苯烯酸钠单克隆抗体的应用，将其应用在食品安全中呋喃苯烯酸钠残留分析检测中。

抗呋喃苯烯酸钠单克隆抗体杂交瘤细胞株SS0716的制备步骤为：

（1）免疫原的制备与鉴定：以呋喃苯烯酸钠为起始反应物，利用其自身的羧基通过碳化二亚胺法与蛋白载体的氨基相连，合成免疫原，包被原也是采用碳化二亚胺法以NSOD与OVA 偶联得到，反应结束后，通过透析分离完全抗原和未偶联的小分子半抗原，通过紫外吸收扫描方法鉴定；

（2）小鼠的免疫：将免疫原与福氏佐剂乳化完全后，通过皮下多点注射免疫BALB/c小鼠。首次免疫采用福氏完全佐剂，加强免疫使用福氏不完全佐剂，冲刺免疫时免疫剂量为前一次免疫剂量的一半，与生理盐水混合均匀后直接进行腹腔注射；各次免疫间隔为三周。第三次免疫后，间隔一周采血检测血清效价和抑制；