[发明专利]一株分泌抗西布曲明特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用

说明书

一株分泌抗西布曲明特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株170502及其应用，属于食品安全免疫检测技术领域。本发明制备的抗西布曲明特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株170502，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14701，保藏日期为2017年9月5日。抗西布曲明特异性单克隆抗体，由所述保藏编号为CGMCC No.14701的杂交瘤细胞株170502所分泌产生。此细胞株分泌的单克隆抗体，对西布曲明具有较好的特异性（IC₅₀值4.3ng/mL），可以用于食品安全中西布曲明的特异性检测。

技术领域

本发明涉及一株分泌抗西布曲明特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检测技术领域。

背景技术

西布曲明(Sibutramine)，为减肥药。饮食控制、运动不能减轻和控制体重的肥胖症治疗，包括减轻体重和维持体重的减轻，治疗应与低热量饮食和运动结合进行。从2002年12月起，一项被称为SCOUT(Sibutramine Cardiovascular Outcome Trial)的大规模实验启动。总共有9800名肥胖症病人和超重者参与了这个实验。参加者都在55岁以上，有过心脏病和糖尿病史，只是近期没有复发。整个实验时间长达六年。将SCOUT实验组与服用安慰剂的对照组相比，服用西布曲明者平均至多减掉2公斤到4公斤。而且这种效果在停药之后能否保持也不清楚。而西布曲明带来了严重但并非致命的心血管疾病风险，如中风、心脏病发作。这项研究直接导致了西布曲明在欧盟的禁止。中国药监局2010年10月30日叫停在中国大陆生产销售，原因就在于西布曲明导致心脑血管病症的发生率。

但由于西布曲明药物价格低廉，且确有一定的抑食减肥功效，屡被一些不法商家巧妙加入减肥食品中牟取暴利。

目前国内外对西布曲明的检测多采用高效液相色谱法（HPLC）、液相色谱与质谱联用法（LC-MS）、气质联用法（GC-MS）等。上述检测方法可进行定量分析并具有较低的检测限，但是通常需要昂贵的仪器和复杂的操作，前处理及检测时间长，严重制约了这些检测方法的推广，无法达到现场大批量快速检测的要求。而免疫分析方法具有低成本、高通量、高灵敏、对技术人员相对要求低等特点，因此适用于大量样品的快速筛查。

发明内容

本发明的目的在于克服上述不足之处，提供一株分泌抗西布曲明特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，其能够分泌对西布曲明具有较高亲和力和检测灵敏度的单克隆抗体，为间接竞争 ELISA 试剂盒以及胶体金试纸条的研发推广奠定基础，可以用来建立西布曲明酶联免疫检测方法，或建立胶体金免疫层析技术快速检测方法。

按照本发明提供的技术方案，一株分泌抗西布曲明特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株170502，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.14701，保藏日期为2017年9月5日。

抗西布曲明特异性单克隆抗体，其由所述保藏编号为CGMCC No.14701的抗西布曲明特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株170502分泌产生。

所述抗西布曲明特异性单克隆抗体的应用，将其应用在食品安全中西布曲明的分析检测。

本发明提供的分泌抗西布曲明特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株170502的制备步骤为：

（1）免疫原的制备与鉴定：以西布曲明为起始反应物，通过氯取代反应衍生出带有氨基的西布曲明衍生物，作为半抗原；然后通过戊二醛法使该半抗原与蛋白载体的羧基相连，反应结束后，通过透析分离完全抗原和未偶联的小分子半抗原，完全抗原通过紫外吸收扫描方法鉴定；

（2）小鼠的免疫：将免疫原与福氏佐剂乳化完全后，通过皮下多点注射免疫BALB/c小鼠。首次免疫采用福氏完全佐剂，加强免疫使用福氏不完全佐剂，冲刺免疫时免疫剂量为前一次免疫剂量的一半，与生理盐水混合均匀后直接进行腹腔注射；各次免疫间隔为三周。第三次免疫后，间隔一周采血检测血清效价和抑制；