[发明专利]一株分泌噻虫胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株J6及其应用

权利要求书

1.一株分泌噻虫胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株J6，所述杂交瘤细胞株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14700，保藏日期为2017年9月5日。

2.一种噻虫胺单克隆抗体，其特征在于：其由权利要求1所述保藏编号为CGMCCNo.14700的杂交瘤细胞株J6分泌产生。

3.权利要求2所述噻虫胺单克隆抗体的制备方法，其特征在于步骤为：取BALB/c小鼠，腹腔注射石蜡油，再腹腔注射保藏编号为CGMCC No. 14700的杂交瘤细胞株J6，注射后收集腹水，将腹水纯化，将获得的单抗低温保存制得。

4.权利要求2所述噻虫胺单克隆抗体的应用，其特征在于：将其应用于识别噻虫胺。

5.如权利要求4所述噻虫胺单克隆抗体的应用，其特征在于：将噻虫胺单克隆抗体应用于制备噻虫胺检测试剂盒。

6.如权利要求1所述分泌噻虫胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株J6，其特征在于：通过噻虫胺完全抗原制备而成。

7.如权利要求6所述分泌噻虫胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株J6，其特征在于：所述噻虫胺完全抗原结构式如下：

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8.如权利要求7所述分泌噻虫胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株J6，其特征在于：所述噻虫胺完全抗原的制备方法步骤如下：将噻虫胺半抗原CTA-COOH、N-羟基琥珀酰亚胺NHS溶解于无水N,N-二甲基甲酰胺DMF中，搅拌进行反应，得到噻虫胺半抗原CTA-COOH溶液；将N,N'-二环己基碳二亚胺DCC溶解于无水DMF后，加入到CTA-COOH溶液中，搅拌进行反应，得到A液；将钥孔血蓝蛋白KLH用碳酸盐缓冲溶液CBS稀释，得到B液；将A液加入到B液中进行反应，得到反应液；用PBS溶液透析反应液，得到噻虫胺完全抗原CTA-COOH-KLH；

具体为：将3.8mg噻虫胺半抗原CTA-COOH、1.6mgN-羟基琥珀酰亚胺NHS溶解于300μL无水N,N-二甲基甲酰胺DMF中，室温搅拌反应10min，得到噻虫胺半抗原CTA-COOH溶液；将2.8mg N,N'-二环己基碳二亚胺DCC溶解于100μL无水DMF后，加入到CTA-COOH溶液中，室温搅拌进行反应4-6h，得到A液；将10mg钥孔血蓝蛋白KLH用2mL碳酸盐缓冲溶液CBS稀释，得到B液；逐滴将A液缓慢加入到B液中进行反应，室温反应12h得到反应液；用PBS溶液透析反应液，除去未反应的小分子半抗原，得到完全抗原CTA-COOH-KLH。

9.如权利要求8所述分泌噻虫胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株J6，其特征在于：所述噻虫胺半抗原CTA-COOH结构式如下：

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10.如权利要求9所述分泌噻虫胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株J6，其特征在于：所述噻虫胺半抗原的制备方法步骤如下：将二甲亚砜DMSO溶解噻虫胺CTA，加入氢氧化钾，搅拌并滴加4-巯基丁酸溶液，升温进行反应，得到反应液；待反应液自然冷却后，加入水，以HCl调反应液pH，以正丁醇萃取，得到提取液；提取液经干燥、浓缩、结晶，得到噻虫胺半抗原CTA-COOH。