[发明专利]一种卵母细胞体外成熟培养液的制备方法

说明书

本发明涉及一种卵母细胞体外成熟培养液的制备方法，其特征是：该制备方法步骤如下：步骤1)制备基础IVM培养基；步骤2)在基础IVM培养基中添加脂蛋白，即得：卵母细胞体外成熟培养液。本发明改善了IVM后卵母细胞发育潜力较差，孤雌激活后胚胎发育能力也相对较低的问题，添加脂蛋白后可以使胚胎继续发育到囊胚，添加脂蛋白的IVM培养液提高了胚胎发育潜能，有效的改善了胚胎停育问题。

技术领域

本发明涉及一种培养液的制备方法，特别是一种卵母细胞体外成熟培养液的制备方法。属于医学领域。

背景技术

卵母细胞的体外成熟(in vitro maturation,IVM)是指将GV期或M I期的卵母细胞在体外培养发育到第二次减数分裂中期(M II期) 的过程。IVM可以作为一项技术,结合体外受精(IVF)技术可以有效地应用在生殖医学领域,治疗不孕不育症。

卵母细胞体外成熟技术作为辅助生殖技术重要组成部分，不但能提高卵母细胞利用效率，减少卵巢过度刺激综合征的发生，也为赠卵及女性生育力保存提供了更多选择。近年来，随着生殖医学的快速发展，卵母细胞体外成熟技术研究和临床应用得到了快速发展，但仍面临成熟率低、受精率低、优质胚胎率低及妊娠率低等问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种卵母细胞体外成熟培养液的制备方法，本发明改善了IVM后卵母细胞发育潜力较差，孤雌激活后胚胎发育能力也相对较低的问题。

实现上述目的的技术方案是：一种卵母细胞体外成熟培养液的制备方法，其特征是：该制备方法步骤如下：

步骤1)制备基础IVM培养基；

步骤2)在基础IVM培养基中添加脂蛋白，即得：卵母细胞体外成熟培养液。

所述步骤1)制备基础IVM培养基：

步骤a)采用商品化的组织培养液TCM199为基础细胞培养液；

步骤b)将已经商品化的0.075-0.10IU/ml FSH和0.5-0.8IU/ml HCG，0.1-0.2μg/ml的17β-雌二醇，和10％-20％体积百分比的人商品化替代血清添加到商品化的组织培养液TCM199中；

步骤c)对步骤b)的添加后的商品化的组织培养液TCM199进行过滤；

步骤d)过滤后保存，即得基础IVM培养基。

所述步骤c)中的过滤，通过过滤器进行过滤，所述过滤器为0.22 μm的过滤器。

所述步骤d)中的保存是在温度为4℃环境中保存。

所述步骤d)基础IVM培养基2周内使用。

所述步骤2)在基础IVM培养基中添加20ug/m脂蛋白。

所述步骤2)卵母细胞体外成熟培养液在培养卵母细胞前，卵母细胞体外成熟培养液放置于37℃培养箱内，5％二氧化碳浓度条件下平衡12小时以上。

本发明的优点是：本发明改善了IVM后卵母细胞发育潜力较差，孤雌激活后胚胎发育能力也相对较低的问题，添加脂蛋白后可以使胚胎继续发育到囊胚，添加脂蛋白的IVM培养液提高了胚胎发育潜能，有效的改善了胚胎停育问题。该方法可以使得卵母细胞体外成熟率达到了68.78％，囊胚形成率达到了16.33％。

下面通过具体实施例对本发明做进一步详细说明，但不作为对本发明的限定。

具体实施方式

实施例1

一种卵母细胞体外成熟培养液的制备方法，具体步骤如下：

步骤1)制备基础IVM培养基；