[发明专利]用于检测神经元特异性烯醇化酶的化学发光免疫试剂盒

说明书

本发明提供一种用于检测神经元特异性烯醇化酶的化学发光免疫试剂盒，属于体外诊断技术领域。该试剂盒A包括：校准品、磁颗粒反应液R_a1、示踪结合物反应液R_a2和捕获抗体反应液R_a3。该试剂盒B包括：校准品、磁颗粒反应液R_b1、示踪结合物反应液R_b2和项目稀释反应液R_b3。该试剂盒C包括：校准品、磁颗粒反应液R_c1和示踪结合物反应液R_c2。本发明的试剂盒检测线性范围宽、灵敏度高、特异性好，该试剂盒为全自动化学发光仪器配套试剂，适用于血清和血浆中NSE的定量测定，本发明通过添加适量的Mg²⁺离子，实现血清和EDTA血浆样本的一致性测定，血清与血浆测值相关系数r0.975。

技术领域

本发明属于体外诊断技术领域，涉及一种用于检测神经元特异性烯醇化酶的化学发光免疫试剂盒。

背景技术

神经元特异性烯醇化酶(NSE)是烯醇化酶中的一种，在糖酵解过程中参与催化2-磷酸甘油酸转变成磷酸烯醇式丙酮酸，分子量为78KD，等电点为pH4.7，是一种酸性蛋白酶。烯醇化酶同工酶是由α、β、γ三种亚基以二聚体的形式组合而成，存在αα、αβ、ββ、αγ、γγ五种形式，其中α亚基主要存在于肝、肾等组织，二聚体αα被称为非神经元特异性烯醇化酶，β亚基为骨骼肌和心肌所特有，γ亚基为神经组织和神经内分泌组织所特有，二聚体γγ在神经元中表达，二聚体αγ在小胶质细胞、少突胶质细胞和星形胶质细胞中表达，因此二聚体αγ、γγ被称为NSE。NSE同时发挥炎症作用和神经营养活性作用，在神经元的生长、分化、存活和死亡过程中起着重要的调节作用。因大脑灰质含有大量的神经元，所以NSE在脑组织中的含量最高，占脑神经组织全部可溶性蛋白的1.5％-3％，占人脑皮质烯醇化酶的40％-60％，正常情况下，血清及脑脊液中含有微量的NSE，NSE异常增高与脑损伤、其它神经系统疾病以及肿瘤疾病相关，如脑出血、脑缺血、脑外伤、阿尔茨海默病、神经母细胞瘤、神经内分泌疾病(嗜铬细胞瘤、胰岛细胞瘤、甲状腺髓样癌、黑色素瘤等)和小细胞肺癌等。临床上，NSE主要应用于小细胞肺癌(SCLC)的诊断，它是SCLC最敏感、最特异的肿瘤标志物，NSE在SCLC患者血清中的水平明显高于非小细胞肺癌的患者(肺腺癌、肺鳞癌、大细胞肺癌等)，也可用于鉴别诊断。此外NSE也用于神经母瘤的诊断，它与S-100蛋白联合检测也被用于黑色素瘤的诊断。NSE在上述疾病的早期诊断和预后观察领域具有重要的临床价值。

目前，市场上检验NSE的试剂盒主要分为酶联免疫法、化学发光免疫法和时间分辨荧光法等。传统的酶联免疫法自动化程度不高，受人为因素影响较大，不利于高通量的全自动化检测，特异性和灵敏度有待提高，未来会被自动化程度高的化学发光方法取代。目前进口主流NSE试剂是罗氏的产品，为电化学发光，其检测样本类型单一，只适用于血清样本的检测，血浆和血清样本测值存在较大的差异，所以提供一种血清和血浆样本通用的试剂即可以满足临床多种样本类型的需求，也可以减少病人的二次采样痛苦，另一方面也可以节约时间和经济成本。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有的检验NSE的试剂盒线性区间窄，且对血清和血浆样本的测值存在显著差异的问题，提供一种用于检测神经元特异性烯醇化酶的化学发光免疫试剂盒。

本发明提供一种用于检测神经元特异性烯醇化酶的化学发光免疫试剂盒A，该试剂盒A包括：

校准品、磁颗粒反应液R_a1、示踪结合物反应液R_a2和捕获抗体反应液R_a3；

所述的磁颗粒反应液R_a1包含链酶亲和素磁珠、缓冲液和防腐剂；

所述的示踪结合物反应液R_a2包含吖啶酯标记的NSE抗体、NaCl、氯化镁、缓冲液、防腐剂、阻断剂、蛋白稳定剂和表面活性剂；