[发明专利]一种基于固相杂交技术的EGFR突变基因检测方法

权利要求书

1.一种检测EGFR突变基因的试剂盒，其特征在于，所述检测EGFR突变基因的试剂盒利用了包括基于固相杂交技术的EGFR突变基因检测方法进行检测；所述基于固相杂交技术的EGFR突变基因检测方法，包括以下步骤：

第一步：制备针对不同EGFR突变位点的特异性检测探针，所述检测探针包括15-35bp的碱基序列，所述碱基序列的中部位置包含对应的EGFR突变基因相应的碱基序列；

第二步：将针对不同EGFR突变位点的检测探针分别固定在固相载体的不同位置上或者固定在含有不同编码信息的固相载体上，所述固相载体上需能结合并固定检测探针；

第三步：制备对应不同EGFR突变位点的扩增引物组和针对不同突变位点用以提高反应特异性的blocker组，所述一对引物中的至少一条引物使用标记物进行标记，然后利用modified ARMS-PCR体系扩增待检样品中含突变基因的片段；

第四步：将第三步扩增获得的基因片段与第二步所得的固定有不同特异性检测探针的固相载体进行杂交，从而达到捕获目的扩增片段的目的；

第五步，根据扩增引物上的标记物，采用酶促显色、化学发光或者荧光确定待检样品是否存在以及对应的EGFR突变基因类型；

所述试剂盒包括固定有多个所述特异性检测探针的所述固相载体、含有多个所述扩增引物和多个所述blocker的所述modified ARMS-PCR扩增体系。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的不同EGFR突变位点包括G719D，G719A，G719S，G719C，19-del，EX20insert，T790M，S768I，L858R和L861Q中的至少一个。

3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的固相载体材质可采用玻璃、硅胶、陶瓷、塑料、金属、固相多孔膜、尼龙膜、PVDF膜或者具有不同编码信息的微球中的至少一种，所述固相载体可以与所述的特异性检测探针直接或者间接结合。

4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第三步中标记物可以通过酶促显色、化学发光或者荧光进行检测。

5.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述检测探针为SEQ ID 1-SEQ ID7中的至少一个序列或者其反向互补序列，SEQ ID 1对应的突变类型为19DEL，SEQ ID 2对应的突变类型为G719D/G719A/G719S/G719C，SEQ ID 3对应的突变类型为EX20insert，SEQ ID 4对应的突变类型为L858R，SEQ ID 5对应的突变类型为T790M，SEQ ID 6对应的突变类型为S768I，SEQ ID 7对应的突变类型为L861Q。

6.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述第三步中扩增引物为以下17对中的至少一对：SEQ ID 8和SEQ ID 9；SEQ ID 10和SEQ ID 11；SEQ ID 10和SEQ ID 12；SEQ ID 10和SEQ ID 13；SEQ ID 10和SEQ ID 14；SEQ ID 15和SEQ ID 16；SEQ ID 15和SEQ ID 17；SEQ ID 15和SEQ ID 18；SEQ ID 15和SEQ ID 19；SEQ ID 15和SEQ ID 20；SEQ ID 15和SEQID 21；SEQ ID 22和SEQ ID 23；SEQ ID 24和SEQ ID 25；SEQ ID 26和SEQ ID 27；SEQ ID28和SEQ ID 29。