[发明专利]提取粪便DNA的方法及试剂盒

说明书

本发明提出了提取粪便DNA的方法和用于提取粪便DNA的试剂盒。所述方法包括：将链霉亲合素包被的磁珠与生物素修饰的探针接触，以便获得磁珠‑探针复合物；对待测粪便进行预处理，以便获得预处理液；以及将所述预处理液与所述磁珠‑探针复合物接触，以便提取粪便DNA。利用本发明的方法提取粪便DNA至少具有下列优点的至少之一：特异性强、操作简便、粪便DNA得率高、纯度高和适于规模化应用。

技术领域

本发明涉及生物领域。具体地，本发明涉及提取粪便DNA的方法及试剂盒。

背景技术

近年来兴起的多靶点粪便DNA检测因具有无创性、方便简单、准确性高等优点而成为临床诊断的研究热点之一，其基本原理是正常成人每天都会有上皮细胞脱落至肠腔并随粪便排出体外，而肠道肿瘤细胞由于生物学行为的改变、细胞不正常凋亡、新陈代谢加快等因素，比正常上皮细胞更易脱落。通过收集和检测粪便中肠道肿瘤细胞的异常DNA即可实现癌症的早期筛查。

然而，目前提取粪便DNA的方法及试剂盒仍有待研究。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。

需要说明的是，本发明是基于发明人的下列发现而完成的：

目前，粪便样本中宿主细胞DNA含量较少，且干扰物质种类及含量较多，如各种酶阻抑剂(粘液、细菌和食物残渣等)和胆盐等，导致从粪便里提取出的DNA量非常低或者提取出的DNA质量较低难以用于PCR扩增。而且，现有的粪便DNA提取方法大多操作繁琐、耗时，无法广泛应用。

有鉴于此，发明人利用链霉亲合素包被的磁珠结合生物素修饰的探针特异性地捕获目标基因，同时起到了纯化和富集DNA的目的，提高了DNA提取率和纯度。由此，根据本发明实施例的提取粪便DNA的方法至少具有下列优点的至少之一：特异性强、操作简便、粪便DNA得率高、纯度高和适于规模化应用。

为此，在本发明的一个方面，本发明提出了一种提取粪便DNA的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将链霉亲合素包被的磁珠与生物素修饰的探针接触，以便获得磁珠-探针复合物；对待测粪便进行预处理，以便获得预处理液；以及将所述预处理液与所述磁珠-探针复合物接触，以便提取粪便DNA。发明人利用链霉亲合素包被的磁珠结合生物素修饰的探针特异性地捕获目标基因，同时起到了纯化和富集DNA的目的，提高了DNA提取率和纯度。由此，根据本发明实施例的提取粪便DNA的方法提取粪便DNA至少具有下列优点的至少之一：特异性强、操作简便、粪便DNA得率高、纯度高和适于规模化应用。

根据本发明的实施例，所述提取粪便DNA的方法还可以具有下列附加技术特征：

根据本发明的实施例，所述链霉亲合素包被的磁珠是以磁珠溶液的形式提供，所述生物素修饰的探针是以探针溶液的形式提供，所述磁珠-探针复合物中，所述磁珠浓度为80nM～120nM，所述探针浓度为10nM～15nM。由此，根据本发明实施例的提取粪便DNA的方法进一步具有较高的特异性、较简便的操作、较高的粪便DNA得率或纯度。

根据本发明的实施例，所述链霉亲合素包被的磁珠与生物素修饰的探针的接触时间为1～2小时。由此，根据本发明实施例的提取粪便DNA的方法进一步具有较高的特异性、较简便的操作、较高的粪便DNA得率或纯度。

根据本发明的实施例，所述磁珠-探针复合物是通过下列方式获得的：1)取含有链霉亲合素包被的磁珠溶液，于磁力架上静置，弃上清；2)向步骤1)所得到的磁珠中加入缓冲液清洗磁珠，混匀，进行磁力吸附，弃上清；3)向步骤2)所得到的磁珠中加入缓冲液，重悬所述磁珠，加入含有生物素修饰的探针溶液，室温孵育，以便获得所述磁珠-探针复合物。由此，根据本发明实施例的提取粪便DNA的方法进一步具有较高的特异性、较简便的操作、较高的粪便DNA得率或纯度。