[发明专利]一种公牛ZNF280AY基因拷贝数变异的检测方法及应用在审
| 申请号： | 201810943880.4 | 申请日： | 2018-10-16 |
| 公开（公告）号： | CN109082473A | 公开（公告）日： | 2018-12-25 |
| 发明（设计）人： | 乐祥鹏;裴生伟;李发弟;李万宏;李刚 | 申请（专利权）人： | 兰州大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12N15/11 |
| 代理公司： | 成都天汇致远知识产权代理事务所(普通合伙) 51264 | 代理人： | 韩晓银 |
| 地址： | 730099 甘肃*** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 公牛 拷贝数 基因 基因拷贝数 引物 检测 繁殖 实时定量PCR 荧光定量PCR 关联性分析 基因组DNA 变异检测 常规操作 定量结果 性状选择 有效分子 大样本 繁殖力 灵敏度 扩增 性状 应用 | ||
1.一种用于检测公牛ZNF280AY基因拷贝数变异的PCR扩增引物对，其特征在于，包括引物对P1和引物对P2，所述引物对P1由上游引物F1和下游引物R1组成，所述引物对P2由上游引物F2和下游引物R2组成，所述上游引物F1、所述下游引物R1、所述上游引物F2和所述下游引物R2分别为如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列。
2.一种用于检测公牛ZNF280AY基因拷贝数变异的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的PCR扩增引物对。
3.一种公牛ZNF280AY基因拷贝数变异的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：以公牛基因组DNA为模板，利用权利要求1所述的PCR扩增引物对，通过实时定量PCR分别扩增牛种ZNF280AY基因和SRY参照基因，根据定量结果计算公牛ZNF280AY基因的拷贝数。
4.根据权利要求3所述的一种公牛ZNF280AY基因拷贝数变异的检测方法，其特征在于，所述利用上述PCR扩增引物对，通过实时定量PCR分别扩增牛种ZNF280AY基因和SRY参照基因的具体反应过程为：qPCR扩增体系以10μL计为：5ng/μL模板DNA 1μL，10pmol/L的引物对P1或引物对P2所对应的上、下游引物各0.5μL，2×SYBR Green qPCR Mix 5μL，去离子水3μL，加样后混合均匀，先于95℃预变性3min；再于95℃变性10s，降温至62.5℃退火30s，升温至72℃延伸30s，该过程进行39个循环；最后于72℃终延伸5min。
5.公牛ZNF280AY基因拷贝数变异作为分子标记在公牛辅助选择和分子育种中的应用。
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