[发明专利]一种测定蒽醌类成分含量的方法

说明书

本发明提供了一种测定蒽醌类成分含量的方法，要点在于将蟹壳粉作为基质固相分散萃取的吸附剂与决明子粉末中的目标分子吸附结合，从而使得目标分子从决明子粉末中分离出来，然后使用绿色环保的离子液体作为洗脱剂，得到含有目标分子的洗脱液，洗脱液采用HPLC进行分离检测；本发明集提取与分离于一体，具有操作简单方便、提取分离时间短、提取效率高、安全环保、洗脱剂与样品用量少等优点。

(一)技术领域

本发明涉及一种蒽醌类成分的微量提取检测方法。

(二)背景技术

决明子是豆科植物决明(Cassia obtusifolia L.)或小决明(Cassia tora L.)的干燥成熟种子。决明子具有清热明目、润肠通便的功效，用于治疗目赤涩痛、羞明多泪、头痛眩晕、目暗不明、大便秘结。现代药理研究表明，决明子具有较好的保肝、降血脂、降血压、抗氧化、抗衰老、改善肾功能、抑菌等作用，是国家卫生部门公布的药食同源的中药品种之一。决明子中含有多种成分，主要含蒽醌类成分，包括橙黄决明素(aurantio-obtusin)，黄决明素(chrysoobtusin)，决明蒽醌(obtusifolin)，决明素(obtusin)，芦荟大黄素(aloe-emodin)，大黄酸(rhein)，大黄素(emodin)，大黄酚(chrysophanol)，大黄素甲醚(physcion)等。中国药典2015版将大黄酚和橙黄决明素作为指标性成分控制决明子药材及相关制剂的质量。常用的提取决明子中有效成分的方法，如加热回流提取法、超声提取法、微波萃取法(MAE)等，普遍存在有机溶剂用量大、环境污染大、耗时长、操作繁琐、提取效率低等缺点。

基质固相分散萃取(MSPD)是一种建立在固相萃取基础上的样品前处理新技术，具有溶剂用量少、对环境污染少、萃取时间短、操作简洁、提取效率高等优点，近年来逐渐成为国内外的热门研究，并已经广泛地被应用于天然产物分析检测。目前，在基质固相分散萃取技术中，主要选用硅胶、氧化铝、C₁₈、弗罗里硅土、活性炭等作为吸附剂。

螃蟹作为消费量最高的十大海产品之一，然而，只有一小部分的螃蟹作为食物被送上了餐桌，其余的通常被认为是垃圾并被随意丢弃，造成了蟹壳资源的浪费和由于其低生物降解而导致的环境恶化。因此，开发蟹壳作为生物吸附剂也是非常有意义的。蟹壳由壳聚糖，碳酸钙和一些蛋白质组成。其中，壳聚糖在其聚合链上具有游离的氨基，显示出较高的金属结合力，此外，由于其低成本、高机械强度、刚性结构、耐受剧烈条件的能力和高生物相容性等优点，被应用于吸附重金属和其他物质如磷酸盐和染料。由于蟹壳粉安全无毒，且具有良好的吸附性能，因此作为吸附剂用于基质固相分散。

(三)发明内容

本发明的目的在于解决常规方法存在的样品用量大、耗时长、有毒有机溶剂用量大的问题，建立一种更高效、更绿色环保的提取及检测决明子中蒽醌类成分的方法。

本发明要点在于将蟹壳粉作为基质固相分散萃取的吸附剂与决明子粉末中的目标分子吸附结合，从而使得目标分子从决明子粉末中分离出来，然后使用绿色环保的离子液体作为洗脱剂，得到含有目标分子的洗脱液。洗脱液采用HPLC进行分离检测。相比药典提取方法，本发明的有机溶剂使用量大大减少，安全，经济，环保。

本发明的技术方案如下：

一种测定蒽醌类成分含量的方法，所述蒽醌类成分为橙黄决明素、黄决明素、决明蒽醌、大黄素，所述方法包括以下步骤：

(1)样品分析

将待测样品粉末与吸附剂混合，研磨均匀后加入洗脱剂，再用旋涡混合器进行涡旋混合，接着用孔径0.22μm滤膜过滤，取滤液离心，收集上清液即为提取液，将所得提取液进行高效液相色谱分析，得到样品谱图；

所述待测样品粉末与吸附剂的质量比为1：0.5～2，优选1：0.5；

所述研磨的时间为1～4min，优选3min；