[发明专利]一种金铁锁离体快繁方法

说明书

本发明提供了一种金铁锁的离体快繁方法，涉及植物组培技术领域。本发明所述方法包括以下步骤：1)以消毒后的金铁锁幼嫩组织为外植体，将所述外植体接种于诱导培养基上进行诱导培养，得诱导苗；2)将步骤1)得到的所述诱导苗接种于增殖培养基上进行增殖培养，得丛生苗；3)将从步骤2)得到的所述丛生苗中分离出的单芽接种于生根培养基中进行生根培养，得金铁锁离体快繁苗。本发明所述方案的外植体诱导率达95％，增殖系数达20～25倍以上，生根率达90％以上，移栽成活率达95％以上，未发现突变株，本发明方法能最大程度保持母株的优良性状，不仅操作简单，成本低廉，而且生根率高，根系发达，其组培苗移栽成活率高。

技术领域

本发明属于植物组培技术领域，具体涉及一种金铁锁离体快繁方法。

背景技术

金铁锁(Psammosilene tunicoides)为石竹科金铁锁属药用植物，是中国西南地区特有单种属植物。金铁锁为中国传统名药“云南白药”的主要成分之一，也是多种知名中成药的主要成分。近年来随着人们对金铁锁药用价值的不断深入认识，需求量与日俱增。但由于受自然环境因素和人为作用的影响，金铁锁野生资源数量急剧下降，目前已作为珍稀濒危物种列入《中国植物红皮书》，属于国家二级重点保护植物，是研究石竹科系统进化非常重要的材料。生产中用金铁锁主要采用种子进行繁殖，但该方法发芽率极低，且不能保证繁育种苗品质的优良性。组织培养技术可以在短时间内获得大量的繁殖体，对解决金铁锁资源紧缺问题具有重要意义。

目前国内也有少量有关金铁锁组织培养的文献报道，但多通过诱导愈伤组织进行金铁锁组织培养技术的研究，如陈杰等(2016)、李斌等(2016)、李景滨等(2011)均采用先诱导愈伤组织发生，然后通过诱导愈伤组织分化后获得金铁锁组培苗，该方法不仅操作繁琐其愈伤组织发生变异的概率较高，不能很好的保持母本的优良性状；采用常规的固体培养基诱导金铁锁生根率低，且粘附的固体培养基不易清洗，从而影响组培苗的移栽成活率。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种金铁锁离体快繁方法，突变频率低，能最大程度保持母株的优良性状，不仅操作简单，成本低廉，而且生根率高，根系发达，其组培苗移栽成活率高。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种金铁锁离体快繁方法，包括以下步骤：1)以金铁锁幼嫩组织为外植体，消毒后接种于诱导培养基上进行诱导培养，得诱导苗；所述诱导培养基以MS培养基为基本培养基，还包括0.3～0.5mg/L的6-BA、0.2～0.5mg/L的NAA、25～35g/L的蔗糖和4～7g/L的琼脂；2)将步骤1)得到的所述诱导苗接种于增殖培养基上进行增殖培养，得丛生苗；所述增殖培养基以MS培养基为基本培养基，还包括0.2～0.3mg/L的BA、0.2～0.4mg/L的NAA、0.01～0.03mg/L的PP₃₃₃、25～35g/L的蔗糖和4～7g/L的琼脂；3)将从步骤2)得到的所述丛生苗中分离出的单芽接种于生根培养基中进行生根培养，得金铁锁离体快繁苗；所述生根培养基以改良B5培养基为基本培养基，还包括0.4～0.8mg/L的NAA、0.01～0.03mg/L的PP₃₃₃和25～36g/L的蔗糖。

优选的，步骤1)所述幼嫩组织包括幼嫩茎段。

优选的，步骤1)所述消毒包括将所述外植体置于含洗洁精的水溶液中浸泡3～5min，取出后清洗干净；再置于质量浓度为0.1％的升汞溶液中浸泡5～8min，取出，冲洗4～5次。

优选的，步骤1)所述诱导培养的光照时间为10～15h/d，光照强度为1500～2000lx，所述诱导培养的温度为23～25℃，所述诱导培养的时间为20～28d。

优选的，步骤2)所述增殖培养的光照时间为10～15h/d，光照强度为1500～2000lx，所述增殖培养的温度为23～25℃，所述增殖培养的时间为20～25d。