[发明专利]一种高效产生siRNA的马铃薯Y病毒基因片段、弱毒疫苗、制备方法及其应用

权利要求书

1.一种抗马铃薯Y病毒的弱毒疫苗，其特征在于，弱毒疫苗以TVBMV弱毒突变体为基础，TVBMV弱毒突变体中嵌入了可诱导对马铃薯Y病毒产生交叉保护的有效基因片段，所述的有效基因片段包括可产生siRNA的马铃薯Y病毒基因片段；

所述的TVBMV弱毒突变体由pCamTVBMV在HC-Pro序列中进行四个位点突变获得，所述的位点突变为：52位的精氨酸突变为谷氨酸，198位的天冬氨酸突变为赖氨酸；第250位的异亮氨酸突变为天冬氨酸，251位的谷氨酰胺突变为谷氨酸；

可产生SiRNA的马铃薯Y病毒基因片段包括PVY1片段、PVY2片段和PVY3片段，所述的PVY1片段、PVY2片段和PVY3片段的核苷酸序列分别如Seq ID No.13、Seq ID No.14、Seq IDNo.15所示。

2.根据权利要求1所述的一种抗马铃薯Y病毒的弱毒疫苗，其特征在于，所述的TVBMV弱毒突变体中嵌入PVY1片段或PVY2片段。

3.根据权利要求1所述的一种抗马铃薯Y病毒的弱毒疫苗，其特征在于，所述的TVBMV弱毒突变体中嵌入PVY2片段。

4.一种如权利要求1-3任一所述的抗马铃薯Y病毒的弱毒疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)构建TVBMV弱毒突变体；

(2)获得可诱导对马铃薯Y病毒产生交叉保护的马铃薯Y病毒基因片段PVY1或PVY2或PVY3；

(3)将得到的PVY1或PVY2或PVY3基因片段插入TVBMV弱毒突变体，获得弱毒疫苗。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，以马铃薯Y病毒的基因组为模板，利用PCR技术扩增得到PVY1或PVY2或PVY3片段，然后分别插入到TVBMV弱毒突变体的多克隆位点中，获得含有各基因片段的弱毒疫苗。

6.一种含有如权利要求1-3任一所述的抗马铃薯Y病毒的弱毒疫苗的重组菌。

7.根据权利要求6所述的重组菌，其特征在于，所述的重组菌包括转入了弱毒疫苗的农杆菌。

8.一种如权利要求1-3任一所述的抗马铃薯Y病毒的弱毒疫苗在防治马铃薯Y病毒强毒株系侵染植物方面的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的植物为双子叶植物。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的植物为烟草。