[发明专利]一种检测CACNA1S基因多态性的多重基因检测试剂盒及其使用方法在审
| 申请号： | 201810951433.3 | 申请日： | 2018-08-21 |
| 公开（公告）号： | CN109082466A | 公开（公告）日： | 2018-12-25 |
| 发明（设计）人： | 王凡;吴勇;余丁 | 申请（专利权）人： | 宁波海尔施基因科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6883 | 分类号： | C12Q1/6883 |
| 代理公司： | 余姚德盛专利代理事务所(普通合伙) 33239 | 代理人： | 吴晓微 |
| 地址： | 315040 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基因多态性 多重基因 检测试剂 细胞采集 种检测 核酸 内参 单核苷酸多态性 采集 口腔脱落细胞 多重PCR扩增 试剂盒使用 无核酸酶水 阳性对照液 引物组合物 定性检测 恶性高热 结果分析 结合片段 特异性强 同步分离 样本提取 质量分析 多重PCR 灵敏度 试剂盒 易感性 扩增 判读 通量 位点 基因 | ||
1.一种用于检测CACNA1S基因多态性的多重基因检测试剂盒，其特征在于，包括同步检测针对CACNA1S基因的520C＞T和3257G＞A基因多态性(SNP)位点和4个内参基因扩增的引物组合物、PCR反应液、阳性对照液和无核酸酶水，所述同步检测针对CACNA1S基因的520C＞T和3257G＞A基因多态性(SNP)位点和4个内参基因扩增的引物组合物如表1所示；
表1 CACNA1S基因的SNP位点及内参的引物组合
2.如权利要求1所述的一种用于检测CACNA1S基因多态性的多重基因检测试剂盒，其特征在于，针对每一个SNP位点设计了3条引物，其中2条引物分别与野生型基因和突变型基因互补结合，1条共用的引物与另一段的野生型和突变型引物分别扩增出片段长短有2～10个碱基差异的片段。
3.如权利要求1所述的一种用于检测CACNA1S基因多态性的多重基因检测试剂盒，其特征在于，在所述多重PCR反应中加入4个内参，包括3个人类基因组(huDNA)内参和一个PCR反应内参(pcDNA)。
4.如权利要求1所述的一种用于检测CACNA1S基因多态性的多重基因检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括一管阳性对照液，内含所述2个SNP位点和所述4个内参基因所对应的质粒混合物。
5.如权利要求1所述的一种用于检测CACNA1S基因多态性的多重基因检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒采用的PCR反应液包括以下组分：无核酸酶水、2×PCR缓冲液、DNA聚合酶、dNTP。
6.一种用于检测CACNA1S基因多态性的多重基因检测试剂盒的使用方法，其特征在于，所述使用方法包括以下步骤：(1)采集口腔脱落细胞保存于细胞采集卡，直接扩增或提取核酸；或者，采集血液样本并提取核酸；(2)采用步骤1所述细胞采集卡或提取的核酸为模板进行多重PCR扩增；(3)按PCR产物片段长短/质量同步分离CACNA1S基因2个SNP位点及4个内参；(4)结果分析判读。
7.如权利要求6所述的一种用于检测CACNA1S基因多态性的多重基因检测试剂盒的使用方法，所述PCR反应条件为：95℃5min；94℃10s，61℃1min；70℃1min，循环29次；60℃15min；4℃直至收取PCR产物。
8.如权利要求6所述的一种用于检测CACNA1S基因多态性的多重基因检测试剂盒的使用方法，所述步骤(3)试剂盒分离SNP位点及内参的方法为毛细电泳片段分析方法。
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