[发明专利]淀粉样蛋白纤维与单体的亲和多肽的筛选方法及其在生物传感中的应用

说明书

本发明提供淀粉样蛋白纤维与单体的亲和多肽的筛选方法及其在生物传感中的应用，利用噬菌体展示肽库将纤维与单体分两步进行，纤维亲和肽采用离心分离的方法进行富集，单体亲和肽利用生物素标记的单体与链霉亲和素之间的亲和作用来进行固定而实现富集筛选。根据淀粉样蛋白可形成聚集体的特殊性质，用稳定形态的成熟纤维和生物素标记的单体来分两步进行亲和多肽的筛选，筛选得到的亲和多肽具备选择性结合纤维或单体的能力，从而用于对溶液中淀粉样蛋白不同聚集形态进行分析的方法的开发。

技术领域

本发明涉及生物医药领域技术领域，尤其涉及淀粉样蛋白纤维与单体的亲和多肽的筛选方法及其在生物传感中的应用。

背景技术

淀粉样蛋白是某些蛋白单体经过构象变化，产生聚集体纤维形式的一类蛋白，这类蛋白广泛存在于生命体系中。其中，许多淀粉样蛋白的聚集与重大疾病相关，例如：阿尔兹海默症、二型糖尿病、帕金森病等。近年来，针对淀粉样蛋白的聚集机制及其与疾病的相关性研究越来越受到关注。此外，对于体内淀粉样蛋白的产生途径，诱发因素，以及许多其它生命体系中的非致病性淀粉样蛋白的研究也不断开展。由于淀粉样蛋白的普遍性，对于淀粉样蛋白的分析检测和组装调控研究具有重要意义。

β-Amyloid(1-42)(简称：Aβ1-42)是与阿尔兹海默症密切相关的淀粉样蛋白中占主导地位的一段多肽。它的产生和错误折叠可能是产生阿尔兹海默症的重要因素。Aβ1-42可从单体形式经聚集产生寡聚体形式，再变成原纤维，继续生长成成熟纤维，不同聚集形式的Aβ1-42对神经细胞的毒性不同，并且体内存在的Aβ42的聚集形态可能与阿尔兹海默症发生、发展和病情有一定的相关性。因此，对Aβ42进行分析检测和调控其聚集，对于阿尔兹海默症的预防、诊断和治疗有重要帮助。

噬菌体展示肽库可用于筛选针对蛋白质、细胞、细菌、有机小分子、聚合物和无机材料的亲和多肽，经富集后所得到的亲和多肽序列，具有对靶标的有效亲和性，因此可广泛用于设计生物传感器、控制材料合成、材料表面修饰和功能化等领域。由于亲和多肽的序列特异性和结构特异性，这类多肽具有潜在的识别靶分子结构特征的能力，也包括靶标的大小和形貌差异。因此获得针对淀粉样蛋白的不同聚集形态的亲和多肽，有望用于检测生物样品中这些不同的淀粉样蛋白聚集形态，并调控这些淀粉样蛋白的聚集。

发明内容

本发明的第一个目的在于，提供一种淀粉样蛋白纤维与单体的亲和多肽的筛选方法。

本发明的第二个目的在于，提供利用淀粉样蛋白纤维与单体的亲和多肽的筛选方法筛选得到的淀粉样蛋白β-Amyloid(1-42)的纤维与单体的亲和多肽。

本发明的第三个目的在于，提供利用淀粉样蛋白纤维与单体的亲和多肽的筛选方法筛选得到的淀粉样蛋白β-Amyloid(1-42)的纤维与单体的亲和多肽在制备针对不同聚集形态的β-Amyloid(1-42)电化学生物传感器中的应用。

本发明的第四个目的在于，提供利用淀粉样蛋白纤维与单体的亲和多肽的筛选方法筛选得到的亲和多肽用于对淀粉样蛋白不同聚集形态的分析检测中的应用。

为了实现本发明第一个目的，本发明提供了淀粉样蛋白纤维与单体的亲和多肽的筛选方法，其特征在于，所述筛选方法利用噬菌体展示肽库将纤维与单体分两步进行，纤维亲和肽采用离心分离的方法进行富集，单体亲和肽利用生物素标记的单体与链霉亲和素之间的亲和作用来进行固定而实现富集筛选。

针对纤维进行亲和多肽的筛选首先需制备淀粉样蛋白的成熟纤维，采用离心分离并反复洗涤的方式进行富集筛选；针对单体的亲和多肽筛选，采用生物素标记的单体与链霉亲和素之间的亲和作用将单体进行固定，再通过反复洗涤进行富集筛选。两步筛选方法所获得的出现频率最高的亲和肽，具备序列上的差异性。