[发明专利]人类免疫缺陷病毒快速检测测试卡及其应用

说明书

本发明提供了HIV人抗体和HIV抗原快速检测测试卡，其包括底板、样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫以及荧光微球垫，其中，荧光微球垫吸附I型HIV抗原标记的荧光微球、II型HIV抗原标记的荧光微球、p24抗体标记的荧光微球和质控蛋白标记的荧光微球，硝酸纤维素膜上依次吸附I型HIV抗原、II型HIV抗原、p24抗体和抗所述质控蛋白的抗体。另外，本发明还提供了该测试卡的制备方法和快速检测HIV人抗体和抗原的应用等。

技术领域

本发明属于免疫检测技术领域，具体涉及快速检测人类免疫缺陷病毒(包括 I型和II型)抗体和人类免疫缺陷病毒p24抗原的测试卡及其应用等。

背景技术

艾滋病，获得性免疫缺陷综合征，是一种由人类免疫缺乏病毒(简称HIV) 的反转录病毒感染后，因免疫系统受到破坏，逐渐成为许多伺机性疾病的攻击目标，促成多种临床症状，统称为综合征，而非单纯的一种疾病，而这种综合征可通过直接接触黏膜组织(mucosa)的口腔、生殖器、肛门等或带有病毒的血液、精液、阴道分泌液、乳汁而传染。

由于艾滋病的高传染性，高传播范围及高死亡率，从发现艾滋病起，实际上就建立了相应的实验室诊断方法；由于检测的目的不同，也各自建立起不同的检测方法。检测方法大致分为两类：

1.病原学检测

1)病原分离：严格要求在P3实验室内进行，通过对患者血清高度浓缩，在电子显微镜下观察，分离HIV病毒。

2)原位杂交：用同位素标记克隆的HIV病毒cDNA片段，与患者的组织细胞进行核酸杂交，经过放射自显影，来判定感染病毒的细胞。

3)PCR：扩增HIV cDNA片段，通过荧光标记的特异性核酸探针，来检查是否受到HIV感染。

4)逆转录酶的测定：通过测定患者血清中的逆转录酶的活性，来诊断是否受到HIV感染。

5)淋巴细胞功能测定：通过测定淋巴细胞的功能，主要是对T₄辅助淋巴细胞，来诊断是否感染HIV。

6)p24抗原的检测:通过免疫反应,对血液中的p24抗原进行检测,作为HIV 感染的早期诊断。

2.HIV抗体检测

HIV抗体检测的方法很多，如酶联免疫吸附实验(Enzyme linked immunosorbentassay,ELISA)、明胶颗粒凝集实验(Gelatine particle agglutination assay,PA)、乳胶凝集实验(Latex agglutination assay,LA)、各种快速检测实验(Rapid tests)等。这些实验使用的抗原早期是完整病毒的裂解产物，这种抗原常常由于含有宿主细胞的成分而出现假阳性反应，同时这种抗原制备和纯化都比较困难，危险性大。此后的试剂使用重组或合成多肽HIV抗原，选择与免疫反应相关的抗原决定簇，敏感性和特异性均有所提高，这类抗原制备更为安全、容易、重复性好，但是重组抗原有时由于含有载体的组分而出现假阳性结果，尤其是HIV病毒本身容易突变，而多肽抗原由于缺乏合适的立体构象也会使敏感性下降从而导致假阴性，这将对推广应用来说堪称是灾难性的。

例如，中国专利申请CN105842462A公开了一种检测HIV抗体的免疫层析测试条，应用荧光免疫层析技术和双抗原夹心法检测人血清中的HIV-I和HIV-2 抗体；中国专利申请CN1858594A公开了人类免疫缺陷病毒抗体多指标快速检测方法，其利用包括p24、gp41和gp36等抗原蛋白片断的固定来进行检测；中国专利申请CN102445538A公开了艾滋病(HIV-1/2)尿液快速检测试剂，其基于胶体金技术检测HIV重组抗原p41、p42和p36。