[发明专利]流行性出血热病毒抗体快速检测测试卡及其应用

说明书

本发明提供了流行性出血热病毒人抗体快速检测测试卡，其包括底板、样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫以及荧光微球垫，其中，荧光微球垫吸附流行性出血热病毒抗原标记的荧光微球和质控蛋白标记的荧光微球，硝酸纤维素膜上依次吸附抗人IgG抗体、抗人IgM抗体和抗所述质控蛋白的抗体。另外，本发明还提供了该测试卡的制备方法和快速检测流行性出血热病毒人抗体的应用等。

技术领域

本发明属于免疫检测技术领域，具体涉及快速检测流行性出血热病毒抗体(包括IgG、IgM)的测试卡及其应用等。

背景技术

流行性出血热(epidemic hemorrhagic fever，EHF)是病毒引起的自然疫源性疾病。1982年世界卫生组织(WHO)定名为肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renalsyndromes，HFRS)。是以发热、出血倾向及肾脏损害为主要临床特征的急性病毒性传染病。本病主要分布于欧亚大陆，但HFRS病毒的传播几乎遍及世界各大洲。

流行性出血热的诊断方法为从血清中检测病毒抗原、抗出血热病毒IgG和IgM抗体、病毒RNA等，均作为诊断的依据。人体感染流行性出血热病毒2～3天就可检测到EHF-IgM抗体，7～10天达到高峰，发病2周后出现IgG抗体，可持续数年，单份血清IgM抗体阳性即可诊断；检测急性期和恢复期双份血清IgG抗体，滴度增高4倍以上者也可诊断。目前实验室检测流行性出血热病毒的方法主要有：酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接免疫荧光试验(IFA)、逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)、病毒分离法等。市面上销售的检测流行性出血热病毒IgM抗体的试剂盒以酶联免疫吸附试验为主，主要有捕获法等，但是其检测耗时。

中国专利申请CN1963516A公开了一种流行性出血热病毒抗体胶体金快速检测试纸条；中国专利申请CN1267831A公开了一种肾综合征出血热检测方法及检测试剂盒，也是基于胶体金技术；中国专利申请CN105785000A公开了一种快速检测流行性出血热病毒IgM抗体的试剂盒，也是基于胶体金技术；中国专利申请CN103033616A公开了一种肾综合征出血热病毒IgM抗体检测方法及试剂盒，也是基于胶体金技术。然而，本发明人发现，基于胶体金的检测准确性不够，容易出现假阳性和假阴性结果，尤其是假阴性结果非常影响实际推广，以至于尽管专利众多，但是市面上几乎没有销售。

中国专利申请CN103063841A公开了一种流行性出血热病毒IgM抗体酶联免疫检测试剂盒及其制备和使用方法。然而，本发明人发现，尽管酶联免疫检测准确性佳，但是不够简便，而且耗时长。

为此，本发明人在胶体金检测的基础上，开发了新的流行性出血热病毒IgG、IgM的试剂盒，其不但保持了胶体金检测的快速、简便的特点，而且大幅提高检测的准确性，尤其是避免了假阴性结果，特别适合用于流行性出血热的初筛。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种流行性出血热病毒人抗体快速检测测试卡，其能进行快速检测，便于野外现场检测和床边检测等初筛，同时具有高度的准确性，尤其是避免假阴性结果，适合推广使用。另外，本发明还提供了该测试卡的制备方法和应用等。

具体而言，在第一方面，本发明提供了流行性出血热病毒人抗体快速检测测试卡，其包括底板(1)和依次贴合在底板上的样品垫(2)、硝酸纤维素膜(7)和吸水垫(8)，硝酸纤维素膜(7)与吸水垫(8)连接，其中，样品垫(2)与硝酸纤维素膜(7)之间连接有贴合在底板上的荧光微球垫(3)，其中，荧光微球垫(3)吸附流行性出血热病毒抗原标记的荧光微球和质控蛋白标记的荧光微球，硝酸纤维素膜(7)上在样品垫(2)至吸水垫(8)的方向上有依次吸附抗人IgG抗体、抗人IgM抗体和抗所述质控蛋白的抗体的三条分离的垂直于样品垫(2)至吸水垫(8)的方向的线。