[发明专利]一种C反应蛋白检测试剂及SERS检测方法

权利要求书

1.一种C反应蛋白检测试剂，其特征在于：所述检测试剂由巯基化CRP适配体修饰的Au-NNPs探针和氨基化CRP适配体修饰的AgMNPs磁性捕获基底构成；

所述巯基化CRP适配体修饰的Au-NNPs探针通过如下方法制备得到：

(1)将巯基修饰的单链DNA与AuNPs混合，经冷冻、解冻，得到DNA-AuNPs；

(2)将4-ATP与DNA-AuNPs在搅拌条件下混合孵育，产物经离心分离后分散于超纯水中，得到4-ATP-DNA-AuNPs溶液；

(3)将4-ATP-DNA-AuNPs溶液与PBS溶液和NaCl溶液混合，然后加入PVP、NH₂OH·HCl和HAuCl₄溶液混合反应，产物经离心、洗涤后分散于超纯水中，得到Au-NNPs溶液；

(4)将Au-NNPs溶液与巯基化CRP适配体混合孵育，产物经离心、洗涤后分散于PBS溶液中，得到巯基化CRP适配体修饰的Au-NNPs探针。

2.根据权利要求1所述的一种C反应蛋白检测试剂，其特征在于：所述巯基化CRP适配体的DNA序列为：5'-CGAAGGGGATTCGAGGGGTGATTGCGTGCTCCATTTGGTGTTTTTTTTTTTT-(CH₂)₆-SH-3'；所述氨基化CRP适配体的DNA序列为：5'-CGAAGGGGATTCGAGGGGTGATTGCGTGCTCCATTTGGTGTTTTTTTTTTTT-(CH₂)₆-NH₂-3'。

3.根据权利要求1所述的一种C反应蛋白检测试剂，其特征在于：步骤(1)中所述巯基修饰的单链DNA序列为：5'-CACGCGTTTCTCAAA-(PEG)₉-T₁₀-(CH₂)₃-SH-3'。

4.根据权利要求1所述的一种C反应蛋白检测试剂，其特征在于：步骤(1)中所述AuNPs通过如下方法制备：将HAuCl₄溶液加入到超纯水中，搅拌下加热回流，然后加入柠檬酸钠溶液反应，得到AuNPs。

5.根据权利要求1所述的一种C反应蛋白检测试剂，其特征在于：步骤(1)中所述冷冻、解冻是指在-25℃温度下冷冻2h，然后在室温下解冻。

6.根据权利要求1所述的一种C反应蛋白检测试剂，其特征在于：所述氨基化CRP适配体修饰的AgMNPs磁性捕获基底通过如下方法制备得到：

(1)将AuNPs自组装在Fe₃O₄磁性纳米粒子表面，得到AuNPs-Fe₃O₄磁性纳米粒子，然后加入到含AgNO₃和PVP的水溶液中，超声混匀后加入甲醛、氨水超声反应，产物经磁分离、洗涤，得到AgMNPs；

(2)将MUA和MU加入到AgMNPs的乙醇溶液中，室温孵育，产物经磁分离、洗涤，得到羧基化AgMNPs；

(3)将EDC和NHS加入到羧基化AgMNPs的乙醇溶液中，然后加入PBS缓冲液混合均匀，再加入氨基化CRP适配体的PBS溶液，室温孵育，产物经磁分离、洗涤，得到氨基化CRP适配体修饰的AgMNPs磁性捕获基底。

7.根据权利要求6所述的一种C反应蛋白检测试剂，其特征在于：所述Fe₃O₄磁性纳米粒子通过如下方法制备：将FeCl₃·6H₂O超声溶解于乙二醇中，然后加入聚乙二醇和无水乙酸钠搅拌至完全溶解，200℃条件下反应，产物经磁分离、洗涤、干燥，得到Fe₃O₄磁性纳米粒子。