[发明专利]一种乌拉立肽杂质

权利要求书

1.一种乌拉立肽杂质，其氨基酸序列连接如下：

结构式如式I所示：

2.一种式I乌拉立肽杂质的制备方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

(1)双氧水氧化反应

将乌拉立肽纯品溶解在水中，加入双氧水溶液，室温搅拌反应10～30min。

(2)样品纯化

将步骤(1)所得氧化后的溶液上样高效液相制备色谱柱，以A相有机溶剂和B相缓冲盐溶液作为流动相，进行梯度洗脱，收集洗脱液。

(3)转盐

将步骤(2)所得洗脱液，继续上柱于高效液相制备色谱柱，以A相有机溶剂和C相酸溶液作为流动相，进行梯度洗脱转盐，紫外检测收集流出液。

(4)冻干

将步骤(3)所得洗脱流出液浓缩除去有机溶剂，在真空度≤10mbar，隔板控温20℃条件下冻干10～16h得乌拉立肽杂质纯品。

3.根据权利要求2所述的一种制备乌拉立肽杂质的制备方法，其特征在于，步骤(1)乌拉立肽溶解在水中的浓度为5～20mg/ml；双氧水溶液中双氧水的质量分数为2～5％，乌拉立肽样品溶液与双氧水溶液的体积比为1∶0.8～1.2。

4.根据权利要求2所述的一种式I乌拉立肽杂质的制备方法，其特征在于，步骤(2)与步骤(3)所述A相有机溶剂选自甲醇、乙醇和乙腈中的一种。

5.根据权利要求2所述的一种式I乌拉立肽杂质的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述的B相缓冲盐溶液为磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、磷酸二氢铵、硫酸铵、乙酸铵和甲酸钠溶液中的一种，所述缓冲盐的浓度为20～100mmol/L，缓冲盐溶液的pH为2.0～4.5。

6.根据权利要求2所述的一种式I乌拉立肽杂质的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述C相酸溶液为甲酸或乙酸的水溶液，甲酸或乙酸的体积分数为0.1～1％。

7.一种式I乌拉立肽杂质的检测方法，其特征在于，采用以耐酸型C18键合填料为填充剂的色谱柱，流动相为缓冲盐溶液和有机溶剂不同体积配比的a、b两种流动相，进行梯度洗脱；其中，所述填料耐受pH为1～3；所使用的色谱柱的规格为4.6mm×250mm，填料粒径为5μm或10μm；检测波长为210～220nm；流速为0.8～1.0ml/min，优选为1.0ml/min；柱温为25～35℃，优选为30℃。

8.根据权利要求7所述的一种式I乌拉立肽杂质的检测方法，其特征在于，流动相为

a、b两相的混合溶液，a、b两相均为缓冲盐溶液和有机溶剂的混合溶液；优选地，a相为缓冲盐溶液与有机溶剂体积比9∶1～7∶3，b相为缓冲盐溶液与有机溶剂体积比4∶6～6∶4；所述的有机溶剂选自甲醇和乙腈的一种；所述的缓冲盐选自磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、磷酸二氢铵、硫酸铵、乙酸铵和甲酸钠中的一种；所述的缓冲盐的浓度为10～30mmol/L；所述缓冲液pH为1.5～3.0。

9.根据权利要求7所述的一种式I乌拉立肽杂质的检测方法，其特征在于，梯度洗脱时，流动相a，b两相的洗脱梯度如下：

10.一种式I乌拉立肽杂质在乌拉立肽杂质研究中的用途。