[发明专利]基于图像构建测序模板的方法、碱基识别方法和装置

权利要求书

1.一种基于图像构建测序模板的方法，其特征在于，图像包括分别对应A、T/U、G和C四种碱基延伸反应时的一个相同视野的第一图像、第二图像、第三图像和第四图像，碱基延伸反应时的该视野存在多个带有光学可检测标记的核酸分子，至少一部分核酸分子在图像上表现为亮斑，定义顺序或同时实现一次四种类型碱基延伸反应为一轮测序反应，

第一图像包括图像M1和图像M2，第二图像包括图像N1和图像N2，第三图像包括图像P1和图像P2，第四图像包括图像Q1和图像Q2，

图像M1和图像M2分别来自两轮测序反应，图像N1和图像N2分别来自两轮测序反应，图像P1和图像P2分别来自两轮测序反应，图像Q1和图像Q2分别来自两轮测序反应，方法包括：

组合图像M1、图像M2、图像N1、图像N2、图像P1、图像P2、图像Q1和图像Q2中的任两图像以进行亮斑匹配，并且使图像M1、图像N1、图像N2、图像P1、图像P2、图像Q1和图像Q2均至少一次参与组合，获得包含第一重合亮斑的多个组合图像，在组合图像上距离小于第一预定像素的两个或多个亮斑为一个第一重合亮斑；

合并多个组合图像上的第一重合亮斑，以获得一个对应测序模板的亮斑集合。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，合并多个组合图像上的第一重合亮斑，包括对不同组合图像中的第一重合亮斑进行一次或多次匹配，以获得对应测序模板的亮斑集合。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，图像M1、图像N1、图像P1和图像Q1为顺序获得，图像M2、图像N2、图像P2和图像Q2为顺序获得，

组合图像M1、图像M2、图像N1、图像N2、图像P1、图像P2、图像Q1和图像Q2中的任两图像以进行亮斑匹配，并且使图像M1、图像M2、图像N1、图像N2、图像P1、图像P2、图像Q1和图像Q2均至少一次参与组合，获得包含第一重合亮斑的多个组合图像，包括：

间隔S个图像对图像M1、图像M2、图像N1、图像N2、图像P1、图像P2、图像Q1和图像Q2进行两两组合，获得K个组合图像以及对组合图像上的亮斑进行匹配，弃组合图像上的非重合亮斑，S为整数，0≤S≤S_max，S_max＝参与组合的图像总数-4。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，图像为经过配准的图像。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，配准图像，包括：

基于参考图像对待配准图像进行第一配准，参考图像和待配准图像对应相同视野，包括，

确定待配准图像上的预定区域和参考图像上的相应预定区域的第一偏移量，基于第一偏移量移动待配准图像上的所有亮斑，获得第一配准后的待配准图像；

基于参考图像对第一配准后的待配准图像进行第二配准，包括，

合并第一配准后的待配准图像和参考图像，获得合并图像，

计算合并图像上的预定区域的所有第二重合亮斑的偏移量，以确定第二偏移量，在合并图像上的距离小于第二预定像素的两个或多个亮斑为一个第二重合亮斑，

基于该第二偏移量移动第一配准后的待配准图像上的所有亮斑，以实现对待配准图像的配准。

6.根据权利要求5的所述方法，其特征在于，参考图像通过构建获得，构建参考图像包括：

获取第五图像和第六图像，第五图像和第六图像与待配准图像对应相同视野；

基于第五图像对第六图像进行粗配准，包括确定第六图像和第五图像的偏移量，基于该偏移量移动第六图像，获得粗配准后的第六图像；

合并第五图像和粗配准后的第六图像，以获得参考图像。