[发明专利]一种类风湿因子抗原的制备、检测试剂盒及制备方法

权利要求书

1.一种类风湿因子抗原的制备方法，其特征在于，该方法采用以下步骤：

将IgG溶液与变性缓冲液在4℃平衡混合；

IgG分子与变性剂充分作用后，于55℃~65℃的恒温水浴中热聚反应30~60min，得到多聚的变性IgG；

使用透析缓冲液过滤除去杂质；

用储存缓冲液稀释至浓度为5~30 mg/mL并保存；

所述变性缓冲液由下列配比成分组成：20 mmol/L三羟甲基氨基甲烷缓冲液（Tris）、5~8 mol/L尿素或2~3 mol/L盐酸胍、10~15 mmol/L β-巯基乙醇、0.5~2 g/L叠氮化钠、纯化水，pH值为8.0；

所述透析时采用的透析设备包括但不限于透析袋、中空纤维柱或超滤杯；

所述透析缓冲液为20~100 mmol/L磷酸盐缓冲液（PBS），含0.5~2 g/L叠氮化钠，pH值为7.4；

所述储存缓冲液由下列配比成分组成：20~100 mmol/L磷酸盐缓冲液（PBS）、100~200mM L-精氨酸、30~60 g/L海藻糖、0.5~2 g/L叠氮化钠、纯化水，pH值为7.4。

2.一种检测试剂盒，其特征在于，由试剂R1和试剂R2按体积比为4:1组成，所述试剂R2含有如权利要求1所述方法制备得到的类风湿因子抗原。

3.根据权利要求2所述的一种检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1由下列配比的成分组成：20~100 mmol/L 缓冲液、2~10 g/L稳定剂、1~20 g/L电解质、10~50 g/L增敏剂、1~10g/L表面活性剂、0.5~2 g/L防腐剂、以及纯化水，pH值为5.5~8.0。

4.根据权利要求3所述的一种检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中，

缓冲液选自磷酸盐缓冲液（PBS）、甘氨酸缓冲液、2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲液（MES）、羟乙基哌嗪乙硫磺酸缓冲液（HEPES）、3-（N-吗啉基）丙磺酸缓冲液（Mops）或三羟甲基氨基甲烷缓冲液（Tris）、硼酸盐缓冲液中的任意一种；

所述稳定剂选自但不限于牛血清白蛋白、乙二胺四乙酸二钠或甘氨酸中的一种或多种；

所述电解质为氯化钠或氯化钾中的一种或两种；

所述增敏剂选自但不限于聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000或聚乙二醇20000；

所述表面活性剂选自但不限于吐温20、吐温80、曲拉通X-100、曲拉通X-405、聚乙二醇辛基苯基醚、乙二胺聚氧丙烯聚氧乙烯醚中的一种或多种；

所述防腐剂为选自叠氮化钠、亚硝酸钠、N-甲基-异噻唑酮、N'-亚甲基-双[N'-(3-羟甲基-2,5-二酮-4-咪唑烷基)]脲或2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮和5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮的混合溶液中的一种或几种；

所述pH值经12 mol/L浓盐酸或10 mol/L氢氧化钠溶液调节。

5.根据权利要求4所述的一种检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中，缓冲液为磷酸盐缓冲液，缓冲液pH值为5.5~8.0。

6.根据权利要求4所述的一种检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中，增敏剂为聚乙二醇20000。

7.根据权利要求2所述的一种检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R2由下列配比的成分组成：20~100 mmol/L 缓冲液、2~10 g/L蛋白保护剂、1~20 g/L电解质、5~20 g/L偶联有类风湿因子抗原的胶乳微球、0.5~2 g/L防腐剂、以及纯化水，pH值为7.5~9.0。

8.根据权利要求7所述的一种检测试剂盒，其特征在于，所述偶联有类风湿因子抗原的胶乳微球为偶联多聚变性IgG，粒径为120~250nm的胶乳微球；所述胶乳微球为带有羧基的聚苯乙烯微球，所述羧基含量为0.080~0.470 mmol/g。