[发明专利]一种猫早孕的发光检测试剂的制备方法及应用

说明书

本发明提供一种猫早孕的发光检测试剂的制备方法，将松弛素抗体R021与吖啶酯离心浓缩除去杂质，按照3：1质量比将松弛素抗体R021与吖啶酯充分混匀进行标记偶联，室温下，pH 6.3的条件下，轻轻震荡标记3h，用0.1M的PBS透析，除去未结合的吖啶酯，经过Sephadex G50凝胶层析柱纯化，化学发光仪上收集发光强度高的产物，合并纯化后的松弛素抗体R021与吖啶酯偶联物，保存在发光试剂缓冲液，分装，保存备用，本试剂填补国内没有猫早孕检测试剂的空白，实现猫松弛素的定性、定量、快速检测。在交配后14天，即可检测出是否怀孕，大大早于外部观察法、触诊法和超声波的30天检测，真正实现早早孕检测。

技术领域

本发明是一种猫早孕的发光检测试剂的制备方法及应用，属于生物制剂领域。

背景技术

现有技术中，母猫的妊娠诊断方法很多，目前较常用的方法有外部观察法、触疹检查法、超声波探测法等，外部观察法和触诊法均需要有相当经验的人才能作出较正确的诊断。超声波探测一般怀孕30天的孕猫检测成功率较高，存在检查时间较长的问题，而国内还没有专门针对猫早孕的检测试剂，与人的HCG不同(即猫妊娠用人和犬的早孕试剂是检测不出来，或者不准确的。有种属差异)，猫妊娠的最佳检测指标，现在公认的或者外国成熟的检测指标就是松弛素(Relaxin)。妊娠期猫松弛素的分泌量随着妊娠期增长而逐渐增多，在分娩后或自发流产前迅速下降至无法检测，所以需要一些新的检测试剂要解决上述问题。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明目的是提供一种猫早孕的发光检测试剂的制备方法及应用，以解决上述背景技术中提出的问题。

为了实现上述目的，本发明是通过如下的技术方案来实现：一种猫早孕的发光检测试剂的制备方法，包括如下步骤：

S1：将松弛素抗体R021与吖啶酯离心浓缩除去杂质，按照3：1质量比将松弛素抗体R021与吖啶酯充分混匀进行标记偶联，室温下，pH 6.3的条件下，轻轻震荡标记3h，用0.1M的PBS透析，除去未结合的吖啶酯；

S2：经过Sephadex G50凝胶层析柱纯化，化学发光仪上收集发光强度高的产物，合并纯化后的松弛素抗体R021与吖啶酯偶联物，保存在发光试剂缓冲液，分装，保存备用。

进一步地，所述发光试剂缓冲液采用PBS、1％海藻糖以及0.5％TrionX-100混合，发光试剂缓冲液的pH为6.3。

进一步地，所述松弛素抗体R021采用EDC/NHS法将羧基磁珠活化后与松弛素抗体F102偶联，以制得抗体磁珠，其间通过用pH 6.0的包被缓冲液，清洗羧基磁珠3次，随后加入等质量的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，且1mg磁珠对应1.2mg EDC，置于室温下活化30min；用包被缓冲液洗去未反应的活化剂，加入抗体F102室温反应2h；用封闭缓冲液置换反应液3次后，再加入封闭缓冲液将固相试剂浓度调整为2mg/ml，置于4℃的冰箱保存。

进一步地，所述封闭缓冲液采用0.05M Tris、2％牛血清白蛋白、0.05％Triton X-100以及0.09％叠氮化钠混合制成，所述封闭缓冲液pH为7.5。

进一步地，所述包被缓冲液采用0.05M吗啉乙磺酸(MES)混合制成，所述包被缓冲液pH为6.0。