[发明专利]用于检测rs6065的引物探针组及其应用

说明书

本发明公开了一种用于检测rs6065的引物探针组及其应用。本发明首先保护一种引物探针组，由引物F、引物R和探针P组成；引物F为序列表的序列1所示的单链DNA分子；引物R为序列表的序列2所示的单链DNA分子；探针P为一个末端具有荧光基团且另一个末端具有荧光淬灭基团的单链DNA分子，且DNA分子中的部分核苷酸为锁核酸，DNA分子的核苷酸序列为序列表的序列3所示。本发明可用于检测rs6065，判断待测样本基于该位点的基因型，从而指导医生对病人采取对应治疗方案，具有重大的应用推广价值。

技术领域

本发明涉及一种用于检测rs6065的引物探针组及其应用。

背景技术

免疫性血小板减少症（immune thrombocytopenia，ITP）是自身免疫紊乱产生抗血小板抗体，使得血小板破坏增多，加上巨核细胞成熟障碍血小板生成减少引起的疾病。治疗以肾上腺皮质激素、丙种球蛋白和免疫抑制剂为主要方法。但临床上不少发病年龄小（早于1岁），规则治疗多年仍无缓解的难治性患儿，很可能与血小板功能缺陷，或与血小板互相反应的凝血因子功能缺陷有关。探讨这些功能缺陷对难治性ITP有无影响是有意义的。

血小板抗体事实上就是膜糖蛋白抗体，目前认为主要是针对血小板膜糖蛋白（GP1BA）抗体，GP1BA的变异有可能使得机体易产生相应的抗体，也可能使得血小板激活增加，导致血小板型假性血友病。

血小板抗体的产生与病毒感染有关，机体抗病毒时（病毒致敏）产生了抗血小板膜糖蛋白（GP1BA）抗体进而导致血小板的破坏。给患儿使用激素、丙种球蛋白、免疫抑制剂治疗后，血小板能够维持在正常的状态。但是对于难治性尤其是发病早的患儿，一般是基因变异导致暴露了抗原成分，使血小板成为正常抗体的靶细胞，导致免疫性的血小板破坏；GP1BA基因变异可能导致GP1BA部分结构直接成为免疫反应的抗原，诱导机体产生了针对GP1BA的特异性抗体物质，导致血小板的免疫性减少：GP1BA的基因变异导致的结构变化可能会导致血小板功能的异常而异常聚集。另外，GP1BA遗传变异可能让血小板在凝血过程中受血管性血友病因子协助黏附到内皮细胞的功能下降，不能及时止血。

血小板膜糖蛋白（GP）主要包括血小板膜糖蛋白Ⅰb-Ⅸ复合物（GPⅠb-Ⅸ）、血小板膜糖蛋白Ⅱb-Ⅲa复合物（GPⅡb-Ⅲa）等。血小板膜糖蛋白检测的特异性和敏感性高，故对诊断巨大血小板综合征和血小板无力症具有诊断价值。

研究显示，GP1BA基因557位SNP位点核苷酸由C突变为T，使得该位氨基酸由苏氨酸突变为甲硫氨酸，从而改变了膜糖蛋白的性质，致使血小板被破坏。针对该SNP位点进行基因检测，具有重大的临床应用价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测rs6065的引物探针组及其应用。

本发明首先保护一种引物探针组，由引物F、引物R和探针P组成；

引物F为如下（a1）或（a2）：

（a1）序列表的序列1所示的单链DNA分子；

（a2）将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；

引物R为如下（b1）或（b2）：

（b1）序列表的序列2所示的单链DNA分子；

（b2）将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；

探针P为一个末端具有荧光基团且另一个末端具有荧光淬灭基团的单链DNA分子，且DNA分子中的部分核苷酸为锁核酸，DNA分子的核苷酸序列为如下（c1）或（c2）：

（c1）序列表的序列3所示；

（c2）将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加。