[发明专利]重组人Ⅱ型线粒体动力蛋白样GTP酶基因序列及其应用

说明书

本发明公开了重组人Ⅱ型线粒体动力蛋白样GTP酶基因序列及其应用，其核苷酸序列如SEQ ID NO.:1所示。还公开了一种融合核酸，其包含所述的编码人Ⅱ型线粒体动力蛋白样GTP酶的核酸。进一步公开了一种重组表达载体，其包含上述核酸或融合核酸。还公开了一种转化体，其在宿主中导入上述核酸或融合核酸。本发明所述的编码人Ⅱ型线粒体动力蛋白样GTP酶的核酸表达量更高，因此可在线粒体中获得更多的人Ⅱ型线粒体动力蛋白样GTP酶，能较好地治疗ADOA等眼部疾病。

技术领域

本发明涉及生物制剂领域，尤其涉及重组人Ⅱ型线粒体动力蛋白样GTP酶基因序列及其应用。

背景技术

常染色体显性视神经萎缩ADOA(autosomal dominant optic atrophy)是原发性遗传性视神经病变的最常见形式，发病比例约为1:12 000至1:50 000，并在幼年时期隐匿发病。其临床特征表现为轻度至中度逐渐丧失视力，色觉缺陷，中心视野缺损和颞视盘苍白。起初是乳头状血管束的损伤，其次是视神经的上升萎缩和视神经髓鞘的丧失。

ADOA由编码内线粒体膜蛋白和基因座的基因突变引起，国外学者已确定这类基因主要为OPA1-OPA8，其中已初步确认75﹪左右的ADOA患者与OPA1携带的杂合与显性突变有关，其中外显子740、2794位点突变最常见。OPA1蛋白定位于线粒体内膜，控制能量代谢和凋亡，维持嵴和mtDNA完整性，具有GTP酶活。ADOA的发病机制是：突变的OPA1 编码形成多种截短形式蛋白，这些蛋白通常缺乏完整的GTP酶结构域，等同于缺失一个等位基因，将使OPA1的量大幅下降，出现所谓的单倍体不足，从而使线粒体功能出现障碍。碎片化的线粒体的无法为视神经细胞正常供应ATP，RGC细胞逐渐凋亡，从而导致患者发生ADOA。

ADOA目前尚无方法治疗，是世界公认的遗传性视神经病变之一。随着基因治疗的发展，ADOA的基因治疗成为可能，其中的难点在于OPA1外显子剪接的多种形式以及其突变的多种形式，这就造成多样的致病蛋白类型及突变形式，无法用某一种基因药物治疗所有患者。

国外的研究中已有人对OPA1突变导致ADOA的发病机制进行过研究，分析了OPA1转录和基因产物的多种形式，探索了用于重组OPA1蛋白的更优良纯化方式，并通过家族病史的调查分析寻求如何筛选、鉴定及诊断是否携带缺陷性OPA1，同时还展望了OPA1突变导致的ADOA的预前基因诊断及治疗。但目前尚未出现任何类型的人线粒体动力蛋白样GTP 酶基因的重组应用腺相关病毒载体的报道及生产应用。

因此，本领域亟需开发一种治疗效果好的人线粒体动力蛋白样GTP酶的表达体系及制备方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种治疗效果好的人线粒体动力蛋白样GTP酶的表达体系及制备方法。

本发明的目的是提供一种编码人线粒体动力蛋白样GTP酶的优化核酸序列、载体及制备方法。

本发明的第一方面，提供了一种所述核苷酸序列编码人Ⅱ型线粒体动力蛋白样GTP 酶，且所述核苷酸序列选自下组：

(a)所述核苷酸序列如SEQ ID NO.:1所示；和

(b)所述核苷酸序列与SEQ ID NO.:1所示的核苷酸序列有≥95％相同性，优选地≥ 98％，更优选地≥99％。

在另一优选例中，所述核苷酸序列包括DNA序列、cDNA序列、或mRNA序列。

在另一优选例中，所述核苷酸序列包括单链序列和双链序列。

在另一优选例中，所述核苷酸序列包括与SEQ ID NO.:1完全互补的核苷酸序列。

在另一优选例中，所述核苷酸序列如SEQ ID NO.:1所示，其中

第1-288位为MIS的编码序列；