[发明专利]一种天然方格星虫纤溶酶的制备方法及其应用在审
| 申请号： | 201810968824.6 | 申请日： | 2018-08-23 |
| 公开（公告）号： | CN109295042A | 公开（公告）日： | 2019-02-01 |
| 发明（设计）人： | 许瑞安;马国兴;陈磊;崔秀灵 | 申请（专利权）人： | 许瑞安 |
| 主分类号： | C12N9/64 | 分类号： | C12N9/64;A61K38/48;A61P7/02 |
| 代理公司： | 北京华科联合专利事务所(普通合伙) 11130 | 代理人： | 杨厚;孟旭 |
| 地址： | 福建厦门集美大道*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 方格星虫 纤溶酶 制备 氨基酸序 抗血栓 应用 | ||
1.一种方格星虫纤溶酶，其特征在于，其部分氨基酸序列为SEQ ID NO:1-6所示。
2.权利要求书1所述的方格星虫纤溶酶，其特征在于，由以下方法制备得到：取方格星虫肠组织，加入一定体积的0.02mol/L Tris-HCl缓冲液(pH 7.4)，匀浆，取出于4℃，10000rpm冷冻离心20min，添加硫酸铵使其终浓度达到90％，可见有大量蛋白析出，4℃，10000rpm，冷冻离心20min，收集沉淀。收集的沉淀于少量0.02mol/L Tris-HCl缓冲液(pH7.4)溶解，0.22微米滤膜过滤。Sephadex G-25脱盐；洗脱得到蛋白用2ml/min分别在0.15M、0.2M、0.25M、0.3M、0.35M、0.4M、0.45M、0.5M的NaCl进行DEAE Sepharose Fast Flow层析；洗脱得到的蛋白Superdex75 10/300GL凝胶过滤层析，所得蛋白用1ml/min分别在0.25M、0.3M、0.32M、0.34M、0.36M、0.38M、0.40M、0.45M、0.5M的NaCl进行MonoQ 5/50GL层析洗脱，脱盐与超滤浓。
3.权利要求书1所述的方格星虫纤溶酶，其特征在于，比活力达2001.32U/mg，纯化倍数为6.16，回收率10.9％，相对分子质量为24925.00Da。
4.权利要求书1所述的方格星虫纤溶酶，其特征在于，最适反应pH范围在6.6～9.0；在20℃～40℃下，酶活力保持相对稳定；属于丝氨酸蛋白酶家族。
5.权利要求书1所述的方格星虫纤溶酶，其特征在于，其具有靶向降解纤维蛋白原的的功能，其降解先后顺序为α链>β链>γ链。
6.权利要求书1所述的方格星虫纤溶酶在制备预防和\或治疗血栓的药物中的应用。
7.权利要求1所述的方格星虫纤溶酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：取方格星虫肠组织，加入一定体积的0.02mol/L Tris-HCl缓冲液(pH 7.4)，匀浆，取出于4℃，10000rpm冷冻离心20min，添加硫酸铵使其终浓度达到90％，可见有大量蛋白析出，4℃，10000rpm，冷冻离心20min，收集沉淀。收集的沉淀于少量0.02mol/L Tris-HCl缓冲液(pH7.4)溶解，0.22微米滤膜过滤。Sephadex G-25脱盐；洗脱得到蛋白用2ml/min分别在0.15M、0.2M、0.25M、0.3M、0.35M、0.4M、0.45M、0.5M的NaCl进行DEAE Sepharose Fast Flow层析；洗脱得到的蛋白Superdex75 10/300GL凝胶过滤层析，所得蛋白用1ml/min分别在0.25M、0.3M、0.32M、0.34M、0.36M、0.38M、0.40M、0.45M、0.5M的NaCl进行MonoQ 5/50GL层析洗脱，脱盐与超滤浓。
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