[发明专利]用于检测rs5918的引物探针组及其应用

说明书

本发明公开了一种用于检测rs5918的引物探针组及其应用。本发明首先保护一种引物探针组，由引物F、引物R和探针P组成；引物F为序列表的序列1所示的单链DNA分子；引物R为序列表的序列2所示的单链DNA分子；探针P为一个末端具有荧光基团且另一个末端具有荧光淬灭基团的单链DNA分子，且DNA分子中的部分核苷酸为锁核酸，DNA分子的核苷酸序列为序列表的序列3所示。本发明可用于检测rs5918，判断待测样本基于该位点的基因型，从而指导用药，具有重大的应用推广价值。

技术领域

本发明涉及一种用于检测rs5918的引物探针组及其应用。

背景技术

血小板的主要功能是当血管壁损伤后参与生理性止血，研究发现异常血小板活化与冠心病的发生、发展、治疗和预后密切相关。纤维蛋白原受体是血小板表面最为丰富的整合素，它参与整个止血过程，是血小板激活、黏附和聚集的共同通路。纤维蛋白原受体主要由2个亚基组成，分别是糖蛋白IIb(GPIIb)和糖蛋白IlIa(GPIIIa)。血小板膜糖蛋白是一种存在于血小板膜表面的糖蛋白，在血小板活化和血栓形成的过程中起关键作用。它们在血小板粘附与聚集，血栓形成过程中起了关键作用。血小板GPIIb/IIla可以促使活化后的血小板与纤维蛋白原及相关的黏附蛋白结合，导致血小板聚集，从而在血栓形成发展过程中起重要作用。基因的多态性可能使这些糖蛋白的结构和功能异常，进一步影响血栓的形成。当编码血小板膜GPIIb/IIIa的基因发生突变、缺失或插入时，血小板的结构和功能也随即发生改变。

作为血小板膜上最重要的受体，GPIIIa的基因多态性与阿司匹林在冠心病患者中疗效的关系受到了广泛的关注。研究发现GPIIIa存在多个基因多态性位点，单个氨基酸的罝换将导致原本稳定的等位基因出现变异。rs5918是位于GPIIIa 基因中的一个SNP，存在两种多态形式，T/C，T为野生型，C为突变型。基于rs5918，人群中存在三种基因型，TT/TC/CC, GPIIIa 基因第2个外显子核苷酸第1565位胸腺嘧啶(T)被胞嘧啶(C)所取代，使编码的第33位亮氨酸(PLA1)被脯氨酸(PLA2)所取代。这可能导致GPIIb/IIIa受体结构重要构相改变，从而导致血小板聚集异常,从而发生药物抵抗现象。药物抵抗作用较明显的药物包括：阿司匹林、氯吡格雷等。TT、TC、CC三种基因型分别对应发生血小板聚集的概率，TT基因型最低，TC基因型次之，CC基因型最高。研究表明CC基因型患者在行支架术后，其急性血栓事件发生率是 TT 型的5倍，需要更高剂量药物才能达到抗凝效果。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测rs5918的引物探针组及其应用。

本发明首先保护一种引物探针组，由引物F、引物R和探针P组成；

引物F为如下（a1）或（a2）：

（a1）序列表的序列1所示的单链DNA分子；

（a2）将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；

引物R为如下（b1）或（b2）：

（b1）序列表的序列2所示的单链DNA分子；

（b2）将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；

探针P为一个末端具有荧光基团且另一个末端具有荧光淬灭基团的单链DNA分子，且DNA分子中的部分核苷酸为锁核酸，DNA分子的核苷酸序列为如下（c1）或（c2）：

（c1）序列表的序列3所示；

（c2）将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加。

探针P为5’末端具有FAM荧光基团且3’末端具有BHQ1荧光淬灭基团的单链DNA分子。