[发明专利]苹果砧木M9-T337的组培快繁方法

权利要求书

1.一种苹果砧木M9-T337的组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）M9-T337外植体选择与接种：

取高5-8cm、幼嫩的M9-T337茎尖作为外植体材料；洗去表面的尘土，用洗洁精清洗20min，进而在流水下冲洗2h，最后用无菌水冲洗后置于超净工作台，进行消毒，消毒结束后，接种于诱导培养基上，诱导培养基配方为MS+6-BA0.7mg/L+NAA0.1mg/L+2%-3%蔗糖，每瓶接种3个外植体，置于培养室的培养架上诱导培养，20天诱导出芽；

（2）茎尖脱毒：

将步骤（1）诱导的芽在显微镜下剥出茎尖，再次消毒，消毒结束后将芽的茎尖转接到缓冲培养基上，诱导无菌芽，所述缓冲培养基配方为MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.01mg/L+2%-3%蔗糖，培养40天；

（3）丛生芽诱导：

将步骤（2）培养的生长良好、经分子技术检测无菌、高2-5cm的M9-T337无菌芽转接到诱导丛生芽的培养基上，所述诱导丛生芽的培养基配方为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+3%蔗糖，放置到培养室培养；

（4）增殖扩繁：

将步骤（3）培养的M9-T337丛生芽分株转接到增殖培养基上，放置到培养室培养，30天后可再次转接；

（5）生根培养：

将步骤（4）培养的增殖苗按大小分级后，转接到无糖培养盒中，前3-5天依靠所述无糖培养盒的容器本身的6个自然透气孔进行气体交换，3-5天后人工强制向所述无糖培养盒的容器内通CO₂气体，25-35天后，可出苗移栽。

2.根据权利要求1所述的苹果砧木M9-T337的组培快繁方法，其特征在于，步骤（1）中外植体的消毒方法为：在无菌条件下，先将外植体放入75%酒精中，轻轻晃动30s后将其用无菌水冲洗2遍，再用0.1%的升汞溶液消毒8min后用无菌水冲洗5-6遍。

3.根据权利要求1所述的苹果砧木M9-T337的组培快繁方法，其特征在于，步骤（1）中所述诱导培养条件为：温度25±1℃，光照强度2000Lx，每天光照12h。

4.根据权利要求1所述的苹果砧木M9-T337的组培快繁方法，其特征在于，步骤（2）中茎尖的消毒的方法为：先将茎尖用75%的酒精消毒20s，然后用无菌水冲洗2遍，再用2%的次氯酸钠消毒20min，最后用无菌水冲洗5遍以上。

5.根据权利要求1所述的苹果砧木M9-T337的组培快繁方法，其特征在于，步骤（4）中所述增殖培养基的初始配方为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+3%蔗糖，随着继代次数增多，植物激素含量逐渐降低，所述增殖培养基最终配方为MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.02mg/L+2%蔗糖。

6.根据权利要求1所述的苹果砧木M9-T337的组培快繁方法，其特征在于，步骤（5）中出苗移栽前练苗1-3天即可。