[发明专利]用于鉴别不同血清型传染性支气管炎病毒活疫苗的半套式RT-PCR分型引物及试剂盒在审
| 申请号： | 201810972679.9 | 申请日： | 2018-08-24 |
| 公开（公告）号： | CN108866242A | 公开（公告）日： | 2018-11-23 |
| 发明（设计）人： | 张小荣;吴艳涛;曹永忠;吴天琪;廖凯;苏晋;胡亚歌 | 申请（专利权）人： | 扬州大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6848;C12N15/11 |
| 代理公司： | 南京知识律师事务所 32207 | 代理人： | 卢亚丽 |
| 地址： | 225009 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 试剂盒 活疫苗 血清型 引物 传染性支气管炎病毒 分型检测 鸡传染性支气管炎病毒 鉴别 特异性和敏感性 生物检测技术 套式RT-PCR 特异性引物 传统血清 方法适合 分型引物 检测引物 通用引物 中和试验 常规PCR 低成本 检测 套式 耗时 分析 | ||
1.用于鉴别不同血清型传染性支气管炎病毒活疫苗的半套式RT-PCR分型引物，其特征在于，由序列如SEQ ID NO.1－2所示的通用引物和序列如SEQ ID NO.3－6所示的血清型特异性引物组成；所述不同血清型是M型、4/91型、LDT3-A型和QX型。
2.一种用于鉴别不同血清型传染性支气管炎病毒活疫苗的半套式RT-PCR试剂盒，其特征在于，含有权利要求1所述的用于鉴别不同血清型传染性支气管炎病毒活疫苗的半套式RT-PCR分型引物。
3.权利要求1所述分型引物在制备鉴别M型、4/91型、LDT3-A型和QX型4种血清型IBV活疫苗的半套式RT-PCR试剂盒中的应用。
4.一种鉴别4种血清型IBV疫苗株的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)提取待测样本总RNA并进行反转录合成cDNA；
(2)第一轮PCR扩增：先利用序列如SEQ ID NO.1－2所示的通用引物进行第一轮PCR扩增，对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳分析，利用紫外凝胶成像仪检测目的条带，如果扩增出452bp或458bp大小目的条带则证明为IBV检测阳性，否则为阴性。
(3)以第一轮阳性的PCR产物为模板，利用引物对组合Vac-Mass-F+IB-VacUni-R、Vac-4/91-F+IB-VacUni-R、Vac-LDT3A-F+IB-VacUni-R和Vac-QX-F+IB-VacUni-R分别进行半套式PCR，对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳分析，利用紫外凝胶成像仪检测目的条带，根据条带鉴别出4种血清型IBV疫苗株：
Vac-Mass-F+IB-VacUni-R引物对扩增出194bp大小特异性条带，为M型疫苗株；
Vac-4/91-F+IB-VacUni-R引物对扩增出197bp大小特异性条带，为4/91型毒株；
Vac-LDT3A-F+IB-VacUni-R引物对扩增出200bp大小特异性条带，为LDT3-A型疫苗株；
Vac-QX-F+IB-VacUni-R引物对扩增出200bp大小特异性条带，为QX型疫苗株；
其中，所述的引物IB-VacUni-R、Vac-Mass-F、Vac-4/91-F、Vac-LDT3A-F和Vac-QX-F的序列分别如SEQ ID NO.2－6所示。
5.一种鉴别不同血清型传染性支气管炎病毒活疫苗的检测试剂，其特征在于，含有序列如SEQ ID NO.1-6所示的特异性引物。
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