[发明专利]一种合成依替巴肽硫醚的方法

说明书

本发明涉及一种依替巴肽硫醚化合物，其结构如式I所示。本发明还公开了依替巴肽硫醚的制备方法，其以固相合成方法制备，并以3‑氯丙酸进行末端的合成，以1,4‑二甲基哌嗪为碱，在溶剂中环化，形成硫醚键。本发明的依替巴肽硫醚化合物稳定性高，制备方法简单，具有较好的抗血小板凝聚的作用。

技术领域

本发明属于多肽药物合成领域，具体涉及一种高纯度依替巴肽硫醚的合成方法。

背景技术

依替巴肽(Integrilin)是糖蛋白IIb/IIIa抑制剂类的抗血小板药物。依替巴肽是衍生自在东南侏儒响尾蛇(Sistrurus miliarius barbouri)的毒液中发现的蛋白质的环状七肽。它属于精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-模拟物的类并可逆地结合到血小板。

依替巴肽具有以下结构：

依替巴肽在碱性环境等条件下会发生二硫键的打开，形成多聚体等其他杂质。由于依替巴肽的结构不稳定，对其药效的影响也较大，如何制备得到性质稳定，药效更好的化合物是亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的是提供了一种高收率、纯度高依替巴肽硫醚的合成方法。

为实现上述目的，本发明采取以下技术方案：

本发明一个方面提供了一种依替巴肽硫醚化合物，其结构如式I所示，

本发明另一个方面提供了前述依替巴肽硫醚的制备方法，包括以下步骤：

1)选择合适的固相载体通过固相合成法依次连接Fmoc-Cys(Mmt)-OH，Fmoc-Pro-OH，Fmoc-Trp(Pbf)-OH，Fmoc-Asp(OtBu)–OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Har(Pbf)-OH，得到Har(Pbf)-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Pbf)-Pro-Cys(Mmt)-固相合成树脂；

2)在步骤1)所的的多肽-固相合成树脂上偶联3-氯丙酸，得到Cl-CH₂-CH₂-CONH-Har(Pbf)-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Pbf)-Pro-Cys(Mmt)-固相合成树脂；

3)以脱除试剂脱除氨基酸的侧链保护基Mmt，得到Cl-CH₂-CH₂-CONH-Har(Pbf)-Gly-Asp(OtBu)-Trp(Pbf)-Pro-Cys-固相合成树脂；

4)采用1,4-二甲基哌嗪为碱，在溶剂中环化，形成硫醚键，得到依替巴肽硫醚肽树脂；

5)以裂解剂对依替巴肽硫醚肽树脂进行裂解同时脱除所有侧链保护基，得到的依替巴肽硫醚粗肽；

任选地，6)经过液相纯化、冻干得到依替巴肽硫醚。

上述的依替巴肽硫醚的固相合成工艺，其中，步骤1)中所述的固相载体为RinkAmide树脂、Rink Amide-AM树脂或Rink Amide-MBHA树脂，树脂替代度为0.1-0.8mmol/g，优选0.3～0.5mmol/g。

步骤1)所述的固相合成方法是Fmoc固相多肽合成方法，将树脂上的或者多肽-固相合成树脂上的Fmoc保护基脱除，然后以偶联剂偶联Fmoc保护的氨基酸，再次脱除Fmoc保护基并依次偶联Fmoc保护的氨基酸。

步骤1)中选用的偶联剂为DIPEA+A+B，其中A为HOBt或HOAt，B为PyBOP、PyAOP其中之一。进一步地，偶联剂中各成分的比例以摩尔比例计为DIPEA:A:B＝10:6:5。

步骤2)中所使用的偶联剂为DIC，DIPEA，HOBt，HOAt，PyBOP，PyAOP中的一种或多种的组合。