[发明专利]表达hFcεRIα的RBL-2H3细胞株的构建方法在审
| 申请号： | 201810973996.2 | 申请日： | 2018-08-24 |
| 公开（公告）号： | CN110066768A | 公开（公告）日： | 2019-07-30 |
| 发明（设计）人： | 陈晨;卓勤;霍军生;贾旭东 | 申请（专利权）人： | 中国疾病预防控制中心营养与健康所;国家食品安全风险评估中心 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/867;C07K14/735 |
| 代理公司： | 北京华进京联知识产权代理有限公司 11606 | 代理人： | 王赛 |
| 地址： | 100050*** | 国省代码： | 北京;11 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 构建 重组慢病毒 表达载体 慢病毒包装质粒 慢病毒感染 细胞 共转染 慢病毒 细胞株 | ||
1.一种表达hFcεRIα的RBL-2H3细胞株的构建方法，包括以下步骤：
构建含有hFcεRIα基因的重组慢病毒表达载体；
将所述重组慢病毒表达载体和慢病毒包装质粒共转染到293T细胞得到已包装的慢病毒；以及
用所述已包装的慢病毒感染RBL-2H3细胞。
2.根据权利要求1所述的表达hFcεRIα的RBL-2H3细胞株的构建方法，其特征在于，所述构建含有hFcεRIα基因的重组慢病毒表达载体的步骤包括：
提供所述hFcεRIα基因；
提供原始慢病毒表达载体；以及
将所述hFcεRIα基因与所述原始慢病毒表达载体连接。
3.根据权利要求2所述的表达hFcεRIα的RBL-2H3细胞株的构建方法，其特征在于，所述原始慢病毒表达载体包括GV367载体。
4.根据权利要求1所述的表达hFcεRIα的RBL-2H3细胞株的构建方法，其特征在于，所述慢病毒包装质粒包括pHelper 1.0和pHelper 2.0。
5.根据权利要求4所述的表达hFcεRIα的RBL-2H3细胞株的构建方法，其特征在于，所述重组慢病毒表达载体：pHelper 1.0：pHelper 2.0的质量比为(3～5)：(2～4)：(2～4)。
6.根据权利要求5所述的表达hFcεRIα的RBL-2H3细胞株的构建方法，其特征在于，所述重组慢病毒表达载体：pHelper 1.0：pHelper 2.0的质量比为4：3：3。
7.根据权利要求1所述的表达hFcεRIα的RBL-2H3细胞株的构建方法，其特征在于，所述重组慢病毒表达载体含有绿色荧光蛋白标签。
8.根据权利要求2所述的表达hFcεRIα的RBL-2H3细胞株的构建方法，其特征在于，所述提供所述hFcεRIα基因的步骤包括：
提供人cDNA；
提供用于hFcεRIα基因扩增的上游引物和下游引物，所述上游引物的序列如SEQ IDNO.1所示，所述下游引物的序列如SEQ ID NO.2所示；以及
以所述人cDNA为模板、所述上游引物和所述下游引物为引物，经过PCR扩增得到所述hFcεRIα基因。
9.根据权利要求1所述的表达hFcεRIα的RBL-2H3细胞株的构建方法，其特征在于，用于感染所述RBL-2H3细胞的所述已包装的慢病毒的病毒滴度为1×108TU/mL～1×109TU/mL。
10.根据权利要求1所述的表达hFcεRIα的RBL-2H3细胞株的构建方法，其特征在于，被感染的所述RBL-2H3细胞的细胞密度为1×104个/mL～1×105个/mL。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国疾病预防控制中心营养与健康所;国家食品安全风险评估中心，未经中国疾病预防控制中心营养与健康所;国家食品安全风险评估中心许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201810973996.2/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：一种鼻咽癌组织类器官培养基及培养方法
- 下一篇：用于改善的病毒生产的禽类细胞
