[发明专利]蛋白芯片、蛋白质芯片诊断试剂盒制备及使用方法

权利要求书

1.一种蛋白质芯片，其特征在于：

其包含由以下6种肺癌自身抗原蛋白组成的蛋白质标志物：(1)P53抗原片段，其特征氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；(2)SOX2抗原片段，其特征氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；(3)COPB1抗原片段，其特征氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；(4)EFHD2抗原片段，其特征氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示；(5)EIF4G3抗原片段，其特征氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示；(6)PCNA抗原片段，其特征氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示。

2.如权利要求1所述的蛋白质芯片，其特征在于，所述的肺癌自身抗原蛋白为重组表达纯化的蛋白质。

3.一种包含如权利要求1所述的蛋白质芯片的诊断试剂盒。

4.如权利要求3所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述蛋白质芯片为检测玻片，所述诊断试剂盒还包括：检测校正玻片、样品稀释液、洗涤液和荧光二抗；

其中，所述检测玻片由以下制备方法获得：在大肠杆菌中表达、纯化和分离含所述的6种肺癌自身抗原蛋白的特征氨基酸序列的重组蛋白或重组融合蛋白，使其纯度达到80％以上；在各抗原片段以及人IgG、人IgM中加入适量的生物素化的BSA，以适宜的浓度点样于经醛基化处理的玻璃基片上，将抗原共价交联于基片之上；采用牛血清封闭剩余的交联位点，干燥后4℃干燥保存即得；所述检测校正玻片由以下制备方法获得：将人IgG及人IgM抗体标准品进行倍比稀释，选择适宜的浓度梯度点样于经醛基化处理的玻璃片基上，将抗体标准品共价交联于基片之上，采用牛血清封闭剩余的交联位点，干燥后4℃干燥保存即得；

所述样品稀释液由含10％牛血清的PBS无菌过滤、装瓶即得；

所述洗涤液由含0.02％Tween20的PBS无菌过滤、装瓶即得；

所述荧光二抗由含有适宜稀释度的链霉亲和素-Cy5荧光标记二抗、链霉亲和素-Cy3荧光标记二抗、羊抗人IgG-Cy5荧光标记二抗及羊抗人IgM-Cy3荧光标记二抗装瓶即得。

5.如权利要求4所述的诊断试剂盒，其特征在于，所述检测玻片上还包括癌胚抗原。

6.一种如权利要求4所述的诊断试剂盒的制备方法，其特征在于包括：

检测玻片制备步骤；检测校正玻片制备步骤；样品稀释液制备步骤；洗涤液制备步骤；荧光二抗制备步骤；

所述检测玻片制备步骤为：

在大肠杆菌中表达、纯化和分离含所述的6种肺癌自身抗原蛋白的特征氨基酸序列的重组蛋白或重组融合蛋白，使其纯度达到80％以上；在各抗原片段以及人IgG、人IgM中加入适量的生物素化的BSA，以适宜的浓度点样于经醛基化处理的玻璃基片上，将抗原共价交联于基片之上；采用牛血清封闭剩余的交联位点，干燥后4℃干燥保存；

所述检测校正玻片制备步骤为：

将人IgG及人IgM抗体标准品进行倍比稀释，选择适宜的浓度梯度点样于经醛基化处理的玻璃片基上，将抗体标准品共价交联于基片之上，采用牛血清封闭剩余的交联位点，干燥后4℃干燥保存；所述洗涤液制备步骤为：

将含0.02％Tween20的PBS无菌过滤装瓶；

所述样品稀释液制备步骤为：

将含10％牛血清的PBS无菌过滤装瓶；

所述荧光二抗制备步骤为：

将含有适宜稀释度的链霉亲和素-Cy5荧光标记二抗、链霉亲和素-Cy3荧光标记二抗、羊抗人IgG-Cy5荧光标记二抗及羊抗人IgM-Cy3荧光标记二抗装瓶。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，将癌胚抗原也点于所述检测玻片上。

8.一种权利要求3所述诊断试剂盒在制备早期诊断或普查筛检肺癌的诊断制品中的用途。