[发明专利]一种蛋白质提取方法和应用

权利要求书

1.一种从石蜡包埋组织中提取蛋白质的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将石蜡包埋组织块处理为组织切片；

(2)对步骤(1)所得组织切片进行脱蜡处理；

(3)对步骤(2)脱蜡处理后的组织切片进行乙醇梯度水化处理；

(4)将步骤(3)处理后的组织切片清洗，离心，弃去上清液；

(5)在步骤(4)所得组织沉淀物中添加组织细胞裂解液，再进行金属浴；

(6)对步骤(5)所得混合物离心，取上清即为蛋白质；

其中，组织细胞裂解液为RIPA和脱氧胆酸钠盐的组合，所述组织细胞裂解液中的脱氧胆酸钠盐的质量分数为1.5-4％。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述组织细胞裂解液中的脱氧胆酸钠盐的质量分数为1.5-3％，优选为2％；

优选地，步骤(1)所述切片的厚度为10-30μm；

优选地，步骤(2)之前还包括将步骤(1)所得的切片置于嵌套筛网小室。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述脱蜡处理所用脱蜡剂为TO透明剂；

优选地，所述脱蜡处理的时间为每次5-15min，优选为10min；

优选地，所述脱蜡处理的次数为2-5次，优选为3次。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述乙醇梯度水化处理具体步骤为：

(1’)将步骤(2)所得切片浸入无水乙醇，时间为3-8min，优选为5min；

(2’)将步骤(1’)所得切片浸入95％乙醇，时间为3-8min，优选为5min；

(3’)将步骤(2’)所得切片浸入75％乙醇，时间为3-8min，优选为5min；

(4’)将步骤(3’)所得切片浸入蒸馏水，时间为3-8min，优选为5min；

优选地，步骤(1’)和步骤(4’)独立地进行1-3次。

5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，步骤(5)所述组织沉淀物与组织细胞裂解液的质量体积比为1:5-20mg/μL，优选为1:10mg/μL。

6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，步骤(5)所述金属浴的温度为95-100℃，优选为100℃。

7.根据权利要求1-6任一项所述的方法，其特征在于，步骤(5)所述金属浴的时间为20-40min，优选为30min。

8.根据权利要求1-7任一项所述的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

(1)将石蜡包埋组织块去除多余石蜡，将组织切成厚度为10-30μm的切片，然后置于嵌套筛网小室中；

(2)将步骤(1)所述组织切片浸入TO透明剂脱蜡，脱蜡处理2-5次，每次浸泡8-15min；

(3)对步骤(2)所得组织切片进行乙醇梯度水化处理，先将切片浸入无水乙醇中水化1-3次，每次3-8min，再浸入95％乙醇3-8min，然后浸入75％乙醇3-8min，最后浸入蒸馏水1-3次，每次3-8min；

(4)将步骤(3)所得组织切片淋干，收集于已称重的1.5mL EP管中，用PBS清洗切片，12000-14000rpm离心3-5min，弃去上清液，差量法计算切片的重量；

(5)在步骤(4)所得组织沉淀物中添加组织细胞裂解液，使得组织沉淀物与组织细胞裂解液的质量体积比为1:(5-20)mg/μL，然后进行95-100℃金属浴20-40min；

(6)对步骤(5)所得混合物进行离心，4℃，10000-14000rpm离心15-40min，取上清即为蛋白质；

其中，组织细胞裂解液为RIPA和脱氧胆酸钠盐的组合，所述组织细胞裂解液中的脱氧胆酸钠盐的质量分数为1.5-4％。

9.一种如权利要求1-8任一项所述的方法提取得到的蛋白质。

10.一种如权利要求9所述的蛋白质用于蛋白质免疫印迹实验、免疫沉淀实验、免疫共沉淀实验、单维度蛋白电泳实验、双维度蛋白电泳实验、蛋白芯片实验或质谱分析任意一种或至少两种的蛋白组学实验的用途。