[发明专利]一种检测珊瑚白化病原溶藻弧菌XSBZ03和XSBZ14的引物对、试剂盒和检测方法

权利要求书

1.一种用于同时快速检测珊瑚白化病原溶藻弧菌XSBZ03和XSBZ14的引物对，其特征在于：所述引物对包括上游引物F1和下游引物R1，所述上游引物F1的序列如SEQ ID NO：1所示，下游引物R1的序列如SEQ ID NO：2所示。

2.一种用于同时快速检测珊瑚白化病原溶藻弧菌XSBZ03和XSBZ14的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括：权利要求1所述的上游引物F1、下游引物R1和2× PCR Master Mix，超纯水，阳性对照，阴性对照。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：上游引物F1、下游引物R1各2.0μL、2×PCR Master Mix 25μL、超纯水17μL、阳性对照，阴性对照各一支。

4.根据权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于：所述2× PCR Master Mix由3mmol/LMgCl₂，100mmol/L KCl，500μmol/L dNTP，20mmol/L Tris-HCl及0 .4U/μL AceTaq DNAPolymerase聚合酶组成。

5.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述阳性对照为XSBZ03和XSBZ14的混合灭活冻干粉或XSBZ03和XSBZ14的混合PCR产物。

6.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述阴性对照为超纯水。

7.一种用于非疾病诊断目的同时快速检测珊瑚白化病原溶藻弧菌XSBZ03和XSBZ14的检测方法，其特征在于：所述检测方法是基于权利要求2所述用于同时快速检测珊瑚白化病原溶藻弧菌XSBZ03和XSBZ14的试剂盒的检测方法；所述方法包括以下步骤：

1)PCR模板：提取待检样品DNA；

2)基因扩增：将步骤1)提取的DNA以及阳性对照加入到检测试剂盒中进行PCR扩增；

3)检测：对PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于：步骤1)中所述待检样品为细菌纯培养物或环境水样。

9.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于：PCR反应体系包括超纯水17μL、2×PCR Master Mix 25μL、上，下游引物各2.0μL、待检测样品DNA4.0μL。

10.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于：步骤2)所述PCR扩增过程具体包括：94℃ 5min；94℃ 30s，60℃ 30s，72℃ 60s，35个循环；72℃ 5min。