[发明专利]一种流感疫苗免疫佐剂

说明书

本发明涉及一种流感疫苗免疫佐剂。疫苗佐剂在诱导免疫反应中的主要作用是提高机体免疫系统，提高抗原或者是免疫原的免疫应答反应。疫苗佐剂可以激活固有免疫反应以及提高抗原对免疫系统的递承和刺激作用，进而激活适应性免疫应答。本发明提供的牛骨髓酶解多肽A、B、D虽然本身对流感病毒感染鼠无保护作用，但是却可以有效增强HA对流感病毒感染鼠的保护作用，因而可以用作流感疫苗免疫佐剂。现有技术没有报道过本发明技术方案。

技术领域

本发明涉及疫苗领域，尤其涉及流感疫苗免疫佐剂。

背景技术

流感是常见的呼吸道传染病，可引起较高的死亡率，尤其是新型毒株的出现，可引起世界范围内的流感大流行。接种流感疫苗是预防流感感染和阻止大流行的主要手段。临床中主要的流感疫苗有亚单位疫苗、灭活疫苗以及重组疫苗。这些流感疫苗对于同一亚型的流感病毒能够起到很好的保护作用。

使用免疫佐剂增强高纯化疫苗的免疫原性，是增强疫苗免疫效果的有效方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种流感疫苗免疫佐剂。

为实现上述目的，本发明提供了以下技术方案：

20～30kDa酶解多肽：

一种酶解多肽，通过如下方法制备得到：

步骤S1，将牛骨髓粉末用超纯水溶解；

步骤S2，加入碱性蛋白酶酶解，酶解条件为：pH值，8.5；酶解温度，52℃；酶解时间，10小时；酶解完成后于沸水中水浴15min，12000r/min、4℃条件下离心15min，仔细收集上清即为BBM酶解液；

步骤S3，选取孔径为30kDa和20kDa的超滤膜对BBM酶解液超滤，收集20～30kDa分子量段的超滤液命名为BBM-2；

步骤S4，再将BBM-2组分经孔径为150Da的纳滤膜进行脱盐处理，冷冻干燥即得；

优选地，牛骨髓粉末的制备方法为：取新鲜的牛骨髓用冷水和温水冲洗3～5次，剔除骨头碎片和肉后存于-20℃使其硬化，加1:5比例液氮粉碎成粉末，-40℃备用。

优选地，碱性蛋白酶活力单位为2.4AU/g。

优选地，步骤S1配成质量浓度为100g/L。

优选地，步骤S2中每100g牛骨髓粉末对应添加碱性蛋白酶4.5g。

上述酶解多肽用于制备流感疫苗佐剂的用途。

10～20kDa酶解多肽：

一种酶解多肽，通过如下方法制备得到：

步骤S1，将牛骨髓粉末用超纯水溶解；

步骤S2，加入碱性蛋白酶酶解，酶解条件为：pH值，8.5；酶解温度，52℃；酶解时间，10小时；酶解完成后于沸水中水浴15min，12000r/min、4℃条件下离心15min，仔细收集上清即为BBM酶解液；

步骤S3，选取孔径为20kDa和10kDa的超滤膜对BBM酶解液超滤，收集10～20kDa分子量段的超滤液命名为BBM-3；

步骤S4，再将BBM-3组分经孔径为150Da的纳滤膜进行脱盐处理，冷冻干燥即得；

优选地，牛骨髓粉末的制备方法为：取新鲜的牛骨髓用冷水和温水冲洗3～5次，剔除骨头碎片和肉后存于-20℃使其硬化，加1:5比例液氮粉碎成粉末，-40℃备用。

优选地，碱性蛋白酶活力单位为2.4AU/g。

优选地，步骤S1配成质量浓度为100g/L。