[发明专利]一种用于microRNA检测的光电化学生物传感器的制备方法

权利要求书

1.一种用于microRNA检测的光电化学生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)光电材料的制备，所述的光电材料为离子型双配体环金属铱配合物，其中环金属化配体为香豆素-6，辅助配体为二吡啶并[3,2-a:2’,3’-c]吩嗪，其化学结构如下所示：

(2)ITO工作电极的制备：将面积固定的ITO电极清洗干净并干燥后，将其浸入含30％H₂O₂,30％NH₄OH和H₂O混合溶液中在电极表面形成羟基化层，其中，H₂O₂：NH₄OH：H₂O的体积比为1:1:5；干燥后将其浸入3-氨丙基三甲氧基硅氧烷(APTMS)的5％乙醇溶液中在电极表面形成氨基自组装层，然后浸泡在胶体金溶液中孵化12小时，得到胶体金修饰的ITO电极；与捕获发夹HP1的溶液孵化后通过Au-S键将其固定在电极上得到ITO工作电极；

所述捕获发夹HP1的序列为：

5’-AAAAAATCAAACACCATTGTCACACTCCAGCAATTTGGAGTGTGACAATGGT-3’，其中5’端修饰-SH；

(3)靶microRNA的识别及信号放大：向步骤(2)制得的ITO工作电极上滴加不同浓度的靶microRNA溶液，microRNA与固定在ITO电极上的捕获发夹HP1识别杂交，引发发夹HP2和HP3辅助的杂交链式反应，在ITO工作电极上形成长的DNA双链聚合物；

所述靶microRNA的序列为：UGGAGUGUGACAAUGGUGUUUGA；

所述发夹HP2的序列为：TCAAACACCATTGTCACACTCCAGCAATTTGGAGTGTGACAATGGT；

所述发夹HP3的序列为：TGGAGTGTGACAATGGTGTTTGAACCATTGTCACACTCCAAATTGC；

(4)信号物质的嵌插：将步骤(3)制得的修饰有DNA双链聚合物的ITO电极浸入0.01mM步骤(1)制得的光电材料溶液中孵化40分钟，经清洗后制得光电化学生物传感器；(5)信号检测：将步骤(4)制得的光电化学生物传感器插入0.01M PBS pH＝5.5的缓冲溶液中，采用490nm可见光进行激发，偏置电压为-0.1V。

2.根据权利要求1所述方法制备得到的光电化学生物传感器在microRNA检测中的应用。