[发明专利]一种个体化用药相关基因多态性检测试剂盒及检测方法在审
| 申请号： | 201810987319.6 | 申请日： | 2018-08-28 |
| 公开（公告）号： | CN108949928A | 公开（公告）日： | 2018-12-07 |
| 发明（设计）人： | 林文津;卢雪花;李丽莎;张亚敏;徐小妹;徐榕青;郭舜民;杨兴全 | 申请（专利权）人： | 福建省医学科学研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858;C12Q1/6886;C12N15/11 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡学俊 |
| 地址： | 350001 *** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 个体化用药相关基因 多态性检测 检测结果 试剂盒 检测 基因多态性位点 特异性PCR扩增 生物检测技术 个体化用药 基因多态性 焦磷酸测序 正反向引物 测序引物 高灵敏度 目标序列 实时观察 稳定性强 低成本 高效率 碱基 定性 量化 基因 | ||
1.一种个体化用药相关基因多态性检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包含如下引物序列：
(1)扩增CYP3A4*19的正向引物、反向引物和CYP3A4*19的测序引物，分别如SEQ IDNO.1 、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示；
(2)扩增CYP3A4*18的正向引物、反向引物和CYP3A4*18的测序引物，分别如SEQ IDNO.5 、SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7所示；
(3)扩增CYP3A5*3的正向引物、反向引物和CYP3A5*3的测序引物，分别如SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.11所示；
(4)扩增VEGFR2*1的正向引物、反向引物和VEGFR2*1的测序引物，分别如SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14和SEQ ID NO.15所示；
(5)扩增VEGFR2*2的正向引物、反向引物和VEGFR2*2的测序引物，分别如SEQ IDNO.17、SEQ ID NO.18和SEQ ID NO.19所示；
(6)扩增VEGFR2*3的正向引物、反向引物和VEGFR2*3的测序引物，分别如SEQ IDNO.21、SEQ ID NO.22和SEQ ID NO.23所示。
2.根据权利要求1所述一种个体化用药相关基因多态性检测试剂盒，其特征在于：CYP3A4*19测定的目标序列如SEQ ID NO.4所示；CYP3A4*18测定的目标序列如SEQ ID NO.8所示；CYP3A5*3测定的目标序列如SEQ ID NO.12所示；VEGFR2*1测定的目标序列如SEQ IDNO.16所示；VEGFR2*2测定的目标序列，如SEQ ID NO.20所示；VEGFR2*3测定的目标序列如SEQ ID NO.24所示。
3.根据权利要求1所述一种个体化用药相关基因多态性检测试剂盒，其特征在于： SEQID NO.1、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.21的5’端为生物素标记。
4.根据权利要求1所述一种个体化用药相关基因多态性检测试剂盒，其特征在于：基因突变位点为：CYP3A4*19：A>G，CYP3A4*18：C>T，CYP3A5*3：A>G，VEGFR2*1：C>T，VEGFR2*2：A>T，VEGFR2*3C>T。
5.如权利要求1所述一种个体化用药相关基因多态性检测试剂盒的检测方法，其特征在于：PCR扩增反应体系为：25μL反应体系中含有2×EasyTaq PCR SuperMi×12.5μL、正反向扩增引物各1μL、模板1μL，其余为超纯水。
6.根据权利要求5所述一种个体化用药相关基因多态性检测试剂盒的检测方法，其特征在于：PCR扩增反应体系的反应程序中，CYP3A4*19、CYP3A4*18、CYP3A5*3、VEGFR2*2的PCR反应程序为：95℃，15min，1个循环；94℃，30s，58℃，30s，72℃，45s，30 个循环；72℃，10min，1个循环；4℃，holding。
7.根据权利要求5所述一种个体化用药相关基因多态性检测试剂盒的检测方法，其特征在于：PCR扩增反应体系的反应程序中，VEGFR2*1、VEGFR2*3的PCR反应程序为：95℃，15min，1个循环；94℃，30s，56℃，30s，72℃，45s，30 个循环；72℃，10min，1个循环；4℃，holding。
8.根据权利要求5所述一种个体化用药相关基因多态性检测试剂盒的检测方法，其特征在于：PCR扩增完成后，琼脂糖凝胶电泳检测PCR结果，并进行焦磷酸测序。
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