[发明专利]一种生防酵母菌活性冻干粉及其制备方法

权利要求书

1.一种防治果实炭疽病的季也蒙毕赤酵母（Pichia guilliermondii）Y35-1，于2016年12月5日保存于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO: M2016719。

2. 一种生防酵母菌活性冻干粉，所述冻干粉包括：1×10⁶ ~1×10⁹CFU/mL的季也蒙毕赤酵母（Pichia guilliermondii）Y35-1、2.5~10 wt %的海藻糖、0.05~0.2 wt %的谷胱甘肽。

3. 一种生防酵母菌活性冻干粉，所述冻干粉包括：1×10⁶ ~1×10⁹CFU/mL的季也蒙毕赤酵母（Pichia guilliermondii）Y35-1、5 wt %的海藻糖、0.2 wt %的谷胱甘肽。

4.权利要求2或3所述的冻干粉在果实炭疽病的防治中的应用。

5.权利要求1所述的一种生防酵母菌活性冻干粉的制备方法，其特征在于，所述制备方法如下：

（1）生防酵母菌的富集：将活化后的季也蒙毕赤酵母（Pichia guilliermondii）Y35-1接种于NYDB种子培养基中，培养得到种子液；取种子液接入NYTB发酵培养基中，培养得到酵母菌发酵液；

（2）生防酵母菌悬液的制备：将酵母菌发酵液置于离心杯中，离心，倒掉上清液，用无菌水清洗，所得沉淀用无菌水洗下并制成酵母菌悬液，备用；

（3）添加冻干保护剂：取配制好的海藻糖溶液，在121℃下灭菌处理20min，与酵母菌悬液按等体积比例混合，使混合后样品中海藻糖的浓度为2.5~10 wt%，再添加谷胱甘肽使终浓度为0.05~0.2wt %；

（4）分装：将添加了保护剂的酵母菌悬液混合均匀后倒入平板中；

（5）预冷冻：将分装好的平板用保鲜膜封口，迅速放入恒温冰箱中预冷冻；

（6）真空冷冻干燥：将预冷冻完成的平板迅速转移到冷冻干燥机中；

（7）密封保存：冷冻干燥完成的平板迅速转移到超净工作台内，用保鲜膜和封口膜进行密封；得到生防酵母菌活性冻干粉，保存。

6. 根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述酵母菌悬液浓度为1×10⁶ ~1×10⁹CFU/mL。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述酵母菌悬液浓度为1×10⁸CFU/mL。

8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中所述混合后样品中海藻糖的浓度为5wt%，再添加谷胱甘肽使得终浓度为0.2wt%。

9.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤（5）中所述的预冷冻时间为3h。

10.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤（6）中所述冷冻干燥机冷阱温度为-50℃，抽真空冷冻干燥36h，预冷至-30℃以下。